胶原凝胶混合人肝细胞构建人工肝生物反应器研究

成果基本信息
关键词：	肝细胞;培养;冻存;人工肝;胶原
成果类别：		技术成熟度：
体现形式（基础理论类）：		体现形式（应用技术类）：	无
成果登记号：	9352017J0005	资源采集日期：	2017-11-22

研究情况
单位名称：	福建医科大学孟超肝胆医院	技术水平：
评价证书号：		评价单位：	福州市科技局
评价日期：	2017.03.16	评价证书号：

转化情况
转让范围：		推广形式：	无
已转让企业数（个）：	0

联系方式
联系人（平台）：	孵化基地	联系人（平台）电话：	0771-3394012
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成果简介
本项目是福州市科技局计划项目。目前的非生物人工肝（不含肝细胞）临床疗效不佳。本项目目的是构建含人肝细胞的人工肝生物反应器。为此须改进现有的人肝细胞冻存和培养技术，改进胶原溶液的灭菌和用胶原溶液混合人肝细胞构建反应器的方法。　　（1）以微团形式冻存肝组织来提高冻存肝细胞存活率。完成了超速玻璃化冻存肝细胞聚集体（组织微团）的研究。结果：用超速玻璃化冻存小鼠肝细胞球形聚集体（直径约100?m，冻存15d）复苏后肝细胞活率（83.6%）明显高于用同法冻存分散肝细胞的活率（60.2%）；用超速玻璃化冻存手术来源经IV型胶原酶有限消化的人肝组织微团（直径约1-5mm，冻存7d）复苏后肝细胞活率达81.9%。为将零星的手术来源人肝细胞集中使用打下了基础。　　（2）以注射方式实现凝胶包埋肝细胞腔内移植和培养。完成了胶原凝胶混合肝细胞注射移植研究。结果：将pH2.8胶原溶液调为pH7.4后可与肝细胞混合，注射到大鼠腹腔或反应器内后，可在30min左右形成胶原凝胶混合肝细胞。（大鼠腹腔内）胶原凝胶混合肝细胞产生的葡萄糖浓度明显高于无胶原游离肝细胞产生的葡萄糖浓度；（反应器内）胶原凝胶混合肝细胞产生的白蛋白、尿素浓度明显高于游离肝细胞产生的相应浓度。　　（3）用紫外线照射为胶原溶液灭菌。完成了紫外线照射摇动容器灭菌法。方法是将胶原溶液移入一白瓷盘中，液层厚为8～12mm，瓷盘固定于一摇床上；将紫外灯及反光罩用75%乙醇消毒后，罩于摇床上，紫外灯管距离瓷盘内液面50～150 mm。打开紫外灯和摇床开关，使瓷盘中的胶原溶液摇动并受紫外线照射，照射30～90min。结果：液层厚12mm，照射90min可使细菌和霉菌培养全部为阴性；液层厚8～12 mm，照射60 min，可使大肠杆菌培养全部为阴性。为将胶原凝胶移植到无菌的中空纤维反应器腔内打下基础。　　（4）以胶原凝胶混合肝细胞培养来提高肝细胞体外培养或中空纤维反应器内培养的肝细胞活力，并验证该反应器体外处理肝病血浆的效果。完成了胶原凝胶混合肝细胞体外培养研究。结果：该法培养液中总蛋白（等于白蛋白）浓度明显高于无胶原游离肝细胞培养液中总蛋白浓度。完成了胶原凝胶混合大鼠肝细胞构建中空纤维反应器及灌注培养研究。结果：含胶原凝胶混合肝细胞反应器(I组)灌注液中白蛋白、尿素浓度明显高于胶原涂层加游离肝细胞反应器（II组）灌注液中的相应值（提示I组的肝细胞合成代谢功能较好）；I组的LDH浓度明显低于II组的LDH浓度（提示I组的肝细胞膜较完整漏出酶较少）。　　（5）胶原凝胶混合人肝细胞构建的生物反应器的功能。已完成胶原凝胶混合手术来源人肝组织微团（经IV型胶原酶消化成直径1-5mm，超速玻璃化冻存7d；再消化成直径约20m）生物反应器构建及功能研究。结果：用肝病病人血浆离体循环灌注该反应器，灌注后血浆中IBIL、血氨、PT值均比灌注前明显降低，提示反应器有较好的肝细胞代谢和净化血浆功能。

成果名称：	胶原凝胶混合人肝细胞构建人工肝生物反应器研究	关键词：	肝细胞;培养;冻存;人工肝;胶原
成果类别：		一级分类名称：	医学生物工程
二级分类名称：		三级分类名称：
研究起止时间：	2013.01 至2015.10	成果体现形式（应用技术类）：	无
成果属性：		成果体现形式（基础理论类）：
技术成熟度：		技术水平：
研究形式：		学科分类1：
单位名称：	福建医科大学孟超肝胆医院	学科分类2：
中图分类号1：		所属高新技术类别：
中图分类号2：		课题来源：
应用行业：		课题立项名称：
国家科技计划子类别：		课题立项编号：	2013-S-125-6
经费实际投入额（万元）：	4.00	评价单位：	福州市科技局
评价形式：	无	应用状态：	无
评价日期：	2017.03.16	转让范围：
评价证书号：		推荐单位：	福建省卫生和计划生育委员会
推广形式：	无	成果登记号：	9352017J0005
成果简介：	本项目是福州市科技局计划项目。目前的非生物人工肝（不含肝细胞）临床疗效不佳。本项目目的是构建含人肝细胞的人工肝生物反应器。为此须改进现有的人肝细胞冻存和培养技术，改进胶原溶液的灭菌和用胶原溶液混合人肝细胞构建反应器的方法。　　（1）以微团形式冻存肝组织来提高冻存肝细胞存活率。完成了超速玻璃化冻存肝细胞聚集体（组织微团）的研究。结果：用超速玻璃化冻存小鼠肝细胞球形聚集体（直径约100?m，冻存15d）复苏后肝细胞活率（83.6%）明显高于用同法冻存分散肝细胞的活率（60.2%）；用超速玻璃化冻存手术来源经IV型胶原酶有限消化的人肝组织微团（直径约1-5mm，冻存7d）复苏后肝细胞活率达81.9%。为将零星的手术来源人肝细胞集中使用打下了基础。　　（2）以注射方式实现凝胶包埋肝细胞腔内移植和培养。完成了胶原凝胶混合肝细胞注射移植研究。结果：将pH2.8胶原溶液调为pH7.4后可与肝细胞混合，注射到大鼠腹腔或反应器内后，可在30min左右形成胶原凝胶混合肝细胞。（大鼠腹腔内）胶原凝胶混合肝细胞产生的葡萄糖浓度明显高于无胶原游离肝细胞产生的葡萄糖浓度；（反应器内）胶原凝胶混合肝细胞产生的白蛋白、尿素浓度明显高于游离肝细胞产生的相应浓度。　　（3）用紫外线照射为胶原溶液灭菌。完成了紫外线照射摇动容器灭菌法。方法是将胶原溶液移入一白瓷盘中，液层厚为8～12mm，瓷盘固定于一摇床上；将紫外灯及反光罩用75%乙醇消毒后，罩于摇床上，紫外灯管距离瓷盘内液面50～150 mm。打开紫外灯和摇床开关，使瓷盘中的胶原溶液摇动并受紫外线照射，照射30～90min。结果：液层厚12mm，照射90min可使细菌和霉菌培养全部为阴性；液层厚8～12 mm，照射60 min，可使大肠杆菌培养全部为阴性。为将胶原凝胶移植到无菌的中空纤维反应器腔内打下基础。　　（4）以胶原凝胶混合肝细胞培养来提高肝细胞体外培养或中空纤维反应器内培养的肝细胞活力，并验证该反应器体外处理肝病血浆的效果。完成了胶原凝胶混合肝细胞体外培养研究。结果：该法培养液中总蛋白（等于白蛋白）浓度明显高于无胶原游离肝细胞培养液中总蛋白浓度。完成了胶原凝胶混合大鼠肝细胞构建中空纤维反应器及灌注培养研究。结果：含胶原凝胶混合肝细胞反应器(I组)灌注液中白蛋白、尿素浓度明显高于胶原涂层加游离肝细胞反应器（II组）灌注液中的相应值（提示I组的肝细胞合成代谢功能较好）；I组的LDH浓度明显低于II组的LDH浓度（提示I组的肝细胞膜较完整漏出酶较少）。　　（5）胶原凝胶混合人肝细胞构建的生物反应器的功能。已完成胶原凝胶混合手术来源人肝组织微团（经IV型胶原酶消化成直径1-5mm，超速玻璃化冻存7d；再消化成直径约20m）生物反应器构建及功能研究。结果：用肝病病人血浆离体循环灌注该反应器，灌注后血浆中IBIL、血氨、PT值均比灌注前明显降低，提示反应器有较好的肝细胞代谢和净化血浆功能。
联系人：	郑玲	成果登记日期：	2017-04-28
联系人email：		单位代码：	93503750
邮政编码222：	350025	联系人电话：	0591-88116105
单位传真：		单位通讯地址：	福建省福州市西洪路312号
单位所在省市：		单位电话：	0591-88116105
转让收入（万元）：	0	单位属性：
合作完成单位：		已转让企业数（个）：	0
成果发布年份：	2017	知识产权形式：
成果完成人：	徐兵;黄素钦;陈怡;赵芝萍;蒋晓织	资源采集日期：	2017-11-22

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