我们利用反向遗传技术通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增流感病毒基因组的8个基因片段，然后将流感病毒全部8个基因片段完整克隆到RNA聚合酶I /RNA聚合酶II反向遗传系统上，获得流感病毒基因组的8个表达质粒，而8个质粒可以通过基因工程技术进行改造来满足所需，构建的 8个表达质粒共转染vero细胞，通过在细胞内转录和表达并包装成具有感染性流感病毒粒子。该技术能在DNA水平上通过碱基突变、缺失、插入和互补等手段构建新的流感病毒株。由于使用反向遗传学技术，改变了高致病性H5N1、H5N2禽流感病毒的表面糖蛋白HA的裂解位置的蛋白序列，并且把N1、N2基因替换成低毒株的基因，经重组得到一种致病性低的疫苗株。这种疫苗株可以在鸡胚中稳定传代（测序确定）。同时用小鼠模型对生产用病毒株进行毒性测定，确保生产株是低毒株。 同时通过工艺摸索，少量制备人禽流感病毒灭活疫苗。对疫苗进行一系列的安全性检测（包括毒性测定）、免疫原性测定，并按药品申报要求进行其他动物学实验（小鼠），确保疫苗的安全、有效。另外，我们对普通流感生产技术加以改良，使其形成对人禽流感病毒灭活疫苗的规模化生产能力。 我们通过对流感病毒的变异方面的研究拟提出新的疫苗设计策略。目前研究显示流感病毒变异是导致疫苗失去作用的主要原因。我们的研究显示流感病毒神经氨酸酶基因(NA)的点突变将会导致疫苗失去作用。我们想用流感病毒灭活疫苗免疫BACB/C小鼠用流感病毒自然界的突变株或我们制备的突变株做攻毒实验，测试流感病毒突变和免疫保护的关系，并提出新的疫苗设计策略。 近年来，高致病性禽流感疫情在全球出现，时常有感染人的报道。在禽流感病毒已发生变异、毒性更高的情况下，一旦出现人际传播，必然导致全球流感大流行，造成大量感染和死亡。在我国，由于人口基数大、卫生条件相对落后，发生人禽流感的危险性更高，对人用禽流感疫苗的需求量也更大。严防禽流感向人传播，是我国防控工作的重点。为此，政府、大学、企业以及其他科研机构，都在积极参与疫苗及药物的研制，一旦人禽流感疫苗研制成功，疫苗能够最终从实验室研制品变成产品，就能有效保障人民健康安全，并在现有国际疫苗市场中抢占先机，进而获得巨额回报。据业内人士预计，未来两年内，中国有价疫苗市场规模有望达到30亿元。由于禽流感疫情的蔓延具有全球化特征，一旦人禽流感疫苗研发成功并面市，将会有广阔的市场前景。

我们利用反向遗传技术通过反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增流感病毒基因组的8个基因片段，然后将流感病毒全部8个基因片段完整克隆到RNA聚合酶I /RNA聚合酶II反向遗传系统上，获得流感病毒基因组的8个表达质粒，而8个质粒可以通过基因工程技术进行改造来满足所需，构建的 8个表达质粒共转染vero细胞，通过在细胞内转录和表达并包装成具有感染性流感病毒粒子。该技术能在DNA水平上通过碱基突变、缺失、插入和互补等手段构建新的流感病毒株。由于使用反向遗传学技术，改变了高致病性H5N1、H5N2禽流感病毒的表面糖蛋白HA的裂解位置的蛋白序列，并且把N1、N2基因替换成低毒株的基因，经重组得到一种致病性低的疫苗株。这种疫苗株可以在鸡胚中稳定传代（测序确定）。同时用小鼠模型对生产用病毒株进行毒性测定，确保生产株是低毒株。 同时通过工艺摸索，少量制备人禽流感病毒灭活疫苗。对疫苗进行一系列的安全性检测（包括毒性测定）、免疫原性测定，并按药品申报要求进行其他动物学实验（小鼠），确保疫苗的安全、有效。另外，我们对普通流感生产技术加以改良，使其形成对人禽流感病毒灭活疫苗的规模化生产能力。 我们通过对流感病毒的变异方面的研究拟提出新的疫苗设计策略。目前研究显示流感病毒变异是导致疫苗失去作用的主要原因。我们的研究显示流感病毒神经氨酸酶基因(NA)的点突变将会导致疫苗失去作用。我们想用流感病毒灭活疫苗免疫BACB/C小鼠用流感病毒自然界的突变株或我们制备的突变株做攻毒实验，测试流感病毒突变和免疫保护的关系，并提出新的疫苗设计策略。 近年来，高致病性禽流感疫情在全球出现，时常有感染人的报道。在禽流感病毒已发生变异、毒性更高的情况下，一旦出现人际传播，必然导致全球流感大流行，造成大量感染和死亡。在我国，由于人口基数大、卫生条件相对落后，发生人禽流感的危险性更高，对人用禽流感疫苗的需求量也更大。严防禽流感向人传播，是我国防控工作的重点。为此，政府、大学、企业以及其他科研机构，都在积极参与疫苗及药物的研制，一旦人禽流感疫苗研制成功，疫苗能够最终从实验室研制品变成产品，就能有效保障人民健康安全，并在现有国际疫苗市场中抢占先机，进而获得巨额回报。据业内人士预计，未来两年内，中国有价疫苗市场规模有望达到30亿元。由于禽流感疫情的蔓延具有全球化特征，一旦人禽流感疫苗研发成功并面市，将会有广阔的市场前景。