乳腺生物反应器是一种利用转基因技术在动物乳腺细胞中特异高效表达多肽药物、工业酶、疫苗和抗体等的蛋白质生物生产技术，目前已成为生物技术领域的研究热点。人乳铁蛋白具有广谱抗菌，抗病毒，抗氧化、抗肿瘤和提高机体免疫力的作用，本研究采用乳腺注射法将乳腺特异性表达载体pBC1-hLF注射到大鼠乳腺组织细胞中，以获得高表达的人乳铁蛋白，为今后应用到大动物身上提供理论依据。本课题按项目合同的工作计划完成研究并取得如下成果： 1. 经过探索尝试，建立改良的分步亚克隆法，该方法特别适合与基因分子大小相差很大（接近10倍）的单克隆位点载体，能够极大的提高连接效率且转化为简便的定向连接。 2. 成功构建人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体pBC1-hLF，测序比对该质粒含有人乳铁蛋白基因的完整CDS序列。经检验其mRNA的大小和序列正确，蛋白的大小和细胞定位准确，表达量较高，并且具有正常的生物功能。证明pBC1质粒比较适合外源基因在动物乳腺的特异性正确高效率表达，具有很好的应用前景。 3. 初步探讨了载体pBC1-hLF转染人乳腺癌细胞和人肺癌细胞表达乳铁蛋白的可能生物学活性，发现人乳铁蛋白在肿瘤细胞内高表达可以抑制肿瘤细胞生长，提高对于辐射治疗的敏感性，提示人乳铁蛋白基因治疗可能是一种有效低毒的肿瘤辅助治疗新方法。 4. 乳腺注射法将脂质体或阳离子载体包裹的质粒pBC1-hLF注射至孕鼠乳腺细胞，检测出转染动物乳腺组织中有hLF的表达，证明乳腺注射法具有转基因的效果，并且更加简单易行。 5. 比较活体转染的效率发现线型多聚阳离子化合物--聚乙烯亚胺能够较好的促进外源基因的活体表达，是一低毒高效的活体转染试剂，具有很好的推广应用前景。 通过本课题的研究我们成功构建出特异性的动物乳腺表达载体，探索出简单易行的新型转基因方法，筛选出高效的活体转染试剂。这些研究证实了通过新型便捷转基因技术开发乳腺反应器来生产人乳铁蛋白的可行性，具有广阔的社会效益和商业前景。

乳腺生物反应器是一种利用转基因技术在动物乳腺细胞中特异高效表达多肽药物、工业酶、疫苗和抗体等的蛋白质生物生产技术，目前已成为生物技术领域的研究热点。人乳铁蛋白具有广谱抗菌，抗病毒，抗氧化、抗肿瘤和提高机体免疫力的作用，本研究采用乳腺注射法将乳腺特异性表达载体pBC1-hLF注射到大鼠乳腺组织细胞中，以获得高表达的人乳铁蛋白，为今后应用到大动物身上提供理论依据。本课题按项目合同的工作计划完成研究并取得如下成果： 1. 经过探索尝试，建立改良的分步亚克隆法，该方法特别适合与基因分子大小相差很大（接近10倍）的单克隆位点载体，能够极大的提高连接效率且转化为简便的定向连接。 2. 成功构建人乳铁蛋白基因乳腺特异性表达载体pBC1-hLF，测序比对该质粒含有人乳铁蛋白基因的完整CDS序列。经检验其mRNA的大小和序列正确，蛋白的大小和细胞定位准确，表达量较高，并且具有正常的生物功能。证明pBC1质粒比较适合外源基因在动物乳腺的特异性正确高效率表达，具有很好的应用前景。 3. 初步探讨了载体pBC1-hLF转染人乳腺癌细胞和人肺癌细胞表达乳铁蛋白的可能生物学活性，发现人乳铁蛋白在肿瘤细胞内高表达可以抑制肿瘤细胞生长，提高对于辐射治疗的敏感性，提示人乳铁蛋白基因治疗可能是一种有效低毒的肿瘤辅助治疗新方法。 4. 乳腺注射法将脂质体或阳离子载体包裹的质粒pBC1-hLF注射至孕鼠乳腺细胞，检测出转染动物乳腺组织中有hLF的表达，证明乳腺注射法具有转基因的效果，并且更加简单易行。 5. 比较活体转染的效率发现线型多聚阳离子化合物--聚乙烯亚胺能够较好的促进外源基因的活体表达，是一低毒高效的活体转染试剂，具有很好的推广应用前景。 通过本课题的研究我们成功构建出特异性的动物乳腺表达载体，探索出简单易行的新型转基因方法，筛选出高效的活体转染试剂。这些研究证实了通过新型便捷转基因技术开发乳腺反应器来生产人乳铁蛋白的可行性，具有广阔的社会效益和商业前景。