本项目主要研究了以我们已克隆出的牛乳铁蛋白肽基因为目的基因，分别构建原核和真核表达载体。鉴于报道的原核表达产物以包涵体的形式存在，我们使用特别构建的一种原核载体，它是一个双顺反子载体，在表达目的多肽的同时表达分子伴侣TrxA，TrxA可帮助目的多肽正确折叠，防止包涵体的形成。真核表达采用毕赤酵母表达系统，该表达系统已实现高密度发酵，可进行工业化生产。真核表达运用分泌表达的方法，让目的多肽分泌到培养基中，有利于目的多肽的纯化。将表达载体转化相应的宿主菌株，分别比较它们表达量和抗菌活性的高低，从中筛选出能高效表达的工程菌株。对高效表达的工程菌株进行发酵，纯化后进行抗菌活性研究。主要研究结果如下： (1) 通过PCR扩增的方法，获得了乳铁蛋白肽目的基因。 (2) 利用pET-22b(+)质粒作为载体，将得到的含乳肽基因与该质粒连接，成功构建大肠杆菌DH5α，并测序正确。 (3) 将重组质粒转入大肠杆菌BL21-plys菌种，诱导表达后工程菌具有一定抑菌活性。 (4) 构建毕赤酵母的工程菌，诱导表达后工程菌抑菌活性与大肠杆菌相比，活性较强。表达量约120mg/L，生物学活性与天然产物相当。

本项目主要研究了以我们已克隆出的牛乳铁蛋白肽基因为目的基因，分别构建原核和真核表达载体。鉴于报道的原核表达产物以包涵体的形式存在，我们使用特别构建的一种原核载体，它是一个双顺反子载体，在表达目的多肽的同时表达分子伴侣TrxA，TrxA可帮助目的多肽正确折叠，防止包涵体的形成。真核表达采用毕赤酵母表达系统，该表达系统已实现高密度发酵，可进行工业化生产。真核表达运用分泌表达的方法，让目的多肽分泌到培养基中，有利于目的多肽的纯化。将表达载体转化相应的宿主菌株，分别比较它们表达量和抗菌活性的高低，从中筛选出能高效表达的工程菌株。对高效表达的工程菌株进行发酵，纯化后进行抗菌活性研究。主要研究结果如下： (1) 通过PCR扩增的方法，获得了乳铁蛋白肽目的基因。 (2) 利用pET-22b(+)质粒作为载体，将得到的含乳肽基因与该质粒连接，成功构建大肠杆菌DH5α，并测序正确。 (3) 将重组质粒转入大肠杆菌BL21-plys菌种，诱导表达后工程菌具有一定抑菌活性。 (4) 构建毕赤酵母的工程菌，诱导表达后工程菌抑菌活性与大肠杆菌相比，活性较强。表达量约120mg/L，生物学活性与天然产物相当。