成果基本信息 | ||||||
关键词: | 基因工程;芋螺毒素;镇痛 | |||||
成果类别: | 应用技术 | 技术成熟度: | 初期阶段 | |||
体现形式(基础理论类): | / | 体现形式(应用技术类): | 新技术 | |||
成果登记号: | 09015036 | 资源采集日期: | 10-2-10 |
研究情况 | |||||
单位名称: | 浙江大学医学部 | 技术水平: | 国内领先 | ||
评价证书号: | 2008-421 | 评价单位: | / | ||
评价日期: | 2007.12.29 | 评价证书号: | 2008-421 |
转化情况 | |||||
转让范围: | 允许出口 | 推广形式: | 技术入股 | ||
已转让企业数(个): | 0 |
联系方式 | |||||
联系人(平台): | 孵化基地 | 联系人(平台)电话: | 0771-3394012 | ||
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成果简介 | |||||
芋螺毒素MVIIA是一种N型钙离子通道的特异抑制剂,有强力的镇痛效应,而没有成瘾性,可用于治疗肿瘤和艾滋病人的晚期疼痛。用基因克隆技术生产芋螺毒素可减低其成本,具很好的应用开发前景。我们用基因工程的方法,构建了芋螺毒素MVIIA的表达质粒,并在大肠杆菌和甲醇酵母体系中成功地表达了芋螺毒素MVIIA。在大肠杆菌中,通过与硫氧还蛋白(Trx)和 谷胱甘肽S转移酶(GST)基因融合体系,经筛选得到了高产菌株,经过亲和纯化,蛋白质产量分别达到50~60mg/L,纯度达95%以上,其中GST融合产物可经肠激酶酶切得到芋螺毒素MVIIA。我们用GST融合兔子免疫球蛋白,成功地得到了芋螺毒素MVIIA的抗体。小鼠热板镇痛试验表明,这种方法生产的芋螺毒素具有强烈的镇痛作用,其作用最高比吗啡强800~1000倍。在甲醇酵母表达体系中,每升发酵液可得到约36mg的芋螺毒素MVIIA。动物实验证明:这种基因重组的芋螺毒素MVIIA具有很高的镇痛活性,其镇痛效力大概是吗啡的800~900倍,制备工艺简单稳定,有较高的实用价值,可以直接进行临床前研究。 上述3条芋螺毒素MVIIA的生产工艺,国内外尚无报道,已申请国家发明专利进行知识产权的保护。与国内外其它生产方法比较,我们用基因工程的生产方法,可以得到工艺简单、质量稳定、成本较低的生产路线,而且得到的与Trx以及GST的融合蛋白质,可以作为中间体,经酶切,得到具有活性的ω-芋螺毒素MVIIA小肽,进行药物开发。已申请国家发明专利4项(已经授权3项),共完成论文6篇,其中4篇已经发表在国外SCI杂志BBRC、BioDrugs、Neuroscience Letters和JBBM。 海洋中有丰富的芋螺资源,为人类提供了充足的资源库。分子生物学技术的应用为研究芋螺毒素的结构和功能关系提供了捷径,也为芋螺资源的开发利用提供了重要的理论依据。 |