酶解牡蛎肉制备免疫抑制作用的活性肽与作用机理研究

成果基本信息
关键词：	牡蛎肉;活性肽;分离纯化
成果类别：		技术成熟度：
体现形式（基础理论类）：		体现形式（应用技术类）：	无
成果登记号：	201710997	资源采集日期：	2018-03-20

研究情况
单位名称：	钦州学院	技术水平：
评价证书号：		评价单位：	广西壮族自治区教育厅
评价日期：	2016.06.24	评价证书号：

转化情况
转让范围：		推广形式：	无
已转让企业数（个）：	0

联系方式
联系人（平台）：	玉女士	联系人（平台）电话：	0771-5885053
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成果简介
1.课题来源与背景　　本课题属于2013年广西高校科研项目（2013LX162）。海洋天然活性肽是海洋药物研究的重要组成部分，它们显示出多种多样的生理活性，但天然存在的海洋活性肽等在生物体中含量低，而且分离纯化困难，难以实现规模化生产。为解决这一瓶颈问题，故课题组提出对“酶解牡蛎肉制备免疫抑制作用的活性肽与作用机理研究”这一项目的研究。　　2.研究目的与意义　　以北部湾牡蛎肉为研究对象，采用动物蛋白酶解、透析、超滤、柱层析等现代提取分离技术，获得分子量低于3000Da系列牡蛎活性肽。通过体外细胞毒性检测、小鼠淋巴细胞增殖实验和混合淋巴细胞实验等对其免疫调节活性进行研究，筛选具有免疫抑制作用的牡蛎活性肽，为我区牡蛎资源的利用开发奠定基础。　　3.创见与创新　　3.1 总结了牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化工艺　　牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化工艺一般流程为：牡蛎→剥壳取肉→清洗→匀浆→酶解→灭酶→离心取上清液→酶解粗提物→分离纯化→活性肽。　　1）小于1kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：碱性蛋白酶Alcalase18U/kg、胰蛋白酶、复合酶2614U／g、537酸性蛋白酶酶。在分离方面，采用凝胶色谱柱，主要型号有：Sephadex G-15、Sephadex G-25。　　2）小于2kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：木瓜蛋白酶、胰酶（2.4×105U/g）。在分离方面，可采用超滤、凝胶色谱柱（用SephadexG-15凝胶柱）和Biogel P2凝胶层析法等。　　3）小于5kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：胰蛋白酶（l：250）、动物蛋白酶。在分离方面，可采用超滤、凝胶色谱柱（用SephadexG-25和SephadexG-50凝胶柱）等。　　3.2 总结了牡蛎活性肽的生物活性作用及作用机制　　1）动物实验及人体外实验研究表明，牡蛎活性肽具有抗肿瘤作用，其作用机制主要是牡蛎活性肽能诱导分化肿瘤细胞、诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖及提高人体的细胞免疫功能而防止肿瘤的发生。　　2）牡蛎活性肽具有抗氧化作用，实验结果显示，牡蛎活性肽能显著降低四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的高血糖，其作用机制主要是牡蛎活性肽能较好地清除人　　体内积累的自由基。　　3）牡蛎活性肽具有降血压作用，其作用机制主要是牡蛎活性肽能抑制人体中血管紧张素转换酶ACE的活性而达到降血压作用。　　4）牡蛎活性肽具有降血糖作用，实验结果显示，牡蛎活性肽能显著降低四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的高血糖。　　4.社会经济效益，存在的问题　　本项目提供了近几年牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化相对分子质量不同小肽的工艺，为牡蛎有效成分的提取分离提供了技术。并总结了牡蛎活性肽的生物活性作用（抗肿瘤活性、抗氧化性、抗高血压性、抗凝血、抗菌性、免疫活性、降血糖等）及作用机理，所撰写的论文“牡蛎蛋白活性肽的分离及生物活性研究进展”发表在中文核心期刊物《食品研究与开发》2015年第8期。论文“牡蛎活性肽超滤分离工艺探索及其抗肿瘤活性研究”发表在钦州学院学报2016年第10期。　　5.成果简介要　　越来越多的研究显示，牡蛎活性肽有多种多样的生理活性，如抗肿瘤活性、抗氧化性、抗高血压性、抗凝血、抗菌性、免疫活性、降血糖等。因此深入开展对牡蛎活性肽的分离及生物活性研究对开发海洋药物资源具有很重要的意义。本项目的研究发现，利用特异的蛋白酶水解牡蛎蛋白质，使其释放出具有活性的肽，这是生产活性肽产品的较好途径。该法除安全性极高，生产条件温和，水解易控制，可定位生产特定的肽，成本低等优点外，还有一个突出的优点，就是可以将一些“惰性蛋白”转变为“活性肽”。牡蛎的蛋白质含量高，是采用酶解法制备生物活性肽的良好原料。其研究成果为课题组对牡蛎的深入研究奠定了良好的基础，同时也为临床抗肿瘤转移新药研发提供参考依据。　　（不少于500字，不超过2000字）

成果名称：	酶解牡蛎肉制备免疫抑制作用的活性肽与作用机理研究	关键词：	牡蛎肉;活性肽;分离纯化
成果类别：		一级分类名称：	生物制药
二级分类名称：		三级分类名称：
研究起止时间：	2013.07 至2016.06	成果体现形式（应用技术类）：	无
成果属性：		成果体现形式（基础理论类）：
技术成熟度：		技术水平：
研究形式：		学科分类1：
单位名称：	钦州学院	学科分类2：
中图分类号1：		所属高新技术类别：
中图分类号2：		课题来源：
应用行业：		课题立项名称：
国家科技计划子类别：		课题立项编号：	2013LX162
经费实际投入额（万元）：	0.50	评价单位：	广西壮族自治区教育厅
评价形式：	无	应用状态：	无
评价日期：	2016.06.24	转让范围：
评价证书号：		推荐单位：	钦州市科学技术局
推广形式：	无	成果登记号：	201710997
成果简介：	1.课题来源与背景　　本课题属于2013年广西高校科研项目（2013LX162）。海洋天然活性肽是海洋药物研究的重要组成部分，它们显示出多种多样的生理活性，但天然存在的海洋活性肽等在生物体中含量低，而且分离纯化困难，难以实现规模化生产。为解决这一瓶颈问题，故课题组提出对“酶解牡蛎肉制备免疫抑制作用的活性肽与作用机理研究”这一项目的研究。　　2.研究目的与意义　　以北部湾牡蛎肉为研究对象，采用动物蛋白酶解、透析、超滤、柱层析等现代提取分离技术，获得分子量低于3000Da系列牡蛎活性肽。通过体外细胞毒性检测、小鼠淋巴细胞增殖实验和混合淋巴细胞实验等对其免疫调节活性进行研究，筛选具有免疫抑制作用的牡蛎活性肽，为我区牡蛎资源的利用开发奠定基础。　　3.创见与创新　　3.1 总结了牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化工艺　　牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化工艺一般流程为：牡蛎→剥壳取肉→清洗→匀浆→酶解→灭酶→离心取上清液→酶解粗提物→分离纯化→活性肽。　　1）小于1kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：碱性蛋白酶Alcalase18U/kg、胰蛋白酶、复合酶2614U／g、537酸性蛋白酶酶。在分离方面，采用凝胶色谱柱，主要型号有：Sephadex G-15、Sephadex G-25。　　2）小于2kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：木瓜蛋白酶、胰酶（2.4×105U/g）。在分离方面，可采用超滤、凝胶色谱柱（用SephadexG-15凝胶柱）和Biogel P2凝胶层析法等。　　3）小于5kDa 肽的制备及分离纯化　　在制备方面，所选择的酶主要有：胰蛋白酶（l：250）、动物蛋白酶。在分离方面，可采用超滤、凝胶色谱柱（用SephadexG-25和SephadexG-50凝胶柱）等。　　3.2 总结了牡蛎活性肽的生物活性作用及作用机制　　1）动物实验及人体外实验研究表明，牡蛎活性肽具有抗肿瘤作用，其作用机制主要是牡蛎活性肽能诱导分化肿瘤细胞、诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖及提高人体的细胞免疫功能而防止肿瘤的发生。　　2）牡蛎活性肽具有抗氧化作用，实验结果显示，牡蛎活性肽能显著降低四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的高血糖，其作用机制主要是牡蛎活性肽能较好地清除人　　体内积累的自由基。　　3）牡蛎活性肽具有降血压作用，其作用机制主要是牡蛎活性肽能抑制人体中血管紧张素转换酶ACE的活性而达到降血压作用。　　4）牡蛎活性肽具有降血糖作用，实验结果显示，牡蛎活性肽能显著降低四氧嘧啶诱导糖尿病小鼠的高血糖。　　4.社会经济效益，存在的问题　　本项目提供了近几年牡蛎蛋白质酶解法制备活性肽及分离纯化相对分子质量不同小肽的工艺，为牡蛎有效成分的提取分离提供了技术。并总结了牡蛎活性肽的生物活性作用（抗肿瘤活性、抗氧化性、抗高血压性、抗凝血、抗菌性、免疫活性、降血糖等）及作用机理，所撰写的论文“牡蛎蛋白活性肽的分离及生物活性研究进展”发表在中文核心期刊物《食品研究与开发》2015年第8期。论文“牡蛎活性肽超滤分离工艺探索及其抗肿瘤活性研究”发表在钦州学院学报2016年第10期。　　5.成果简介要　　越来越多的研究显示，牡蛎活性肽有多种多样的生理活性，如抗肿瘤活性、抗氧化性、抗高血压性、抗凝血、抗菌性、免疫活性、降血糖等。因此深入开展对牡蛎活性肽的分离及生物活性研究对开发海洋药物资源具有很重要的意义。本项目的研究发现，利用特异的蛋白酶水解牡蛎蛋白质，使其释放出具有活性的肽，这是生产活性肽产品的较好途径。该法除安全性极高，生产条件温和，水解易控制，可定位生产特定的肽，成本低等优点外，还有一个突出的优点，就是可以将一些“惰性蛋白”转变为“活性肽”。牡蛎的蛋白质含量高，是采用酶解法制备生物活性肽的良好原料。其研究成果为课题组对牡蛎的深入研究奠定了良好的基础，同时也为临床抗肿瘤转移新药研发提供参考依据。　　（不少于500字，不超过2000字）
联系人：	曹允青	成果登记日期：	2017-04-14
联系人email：		单位代码：	94502348
邮政编码222：	535000	联系人电话：	0777-2807226
单位传真：	0777-2804088;2808566	单位通讯地址：	广西壮族自治区钦州市西环南路89号
单位所在省市：		单位电话：	0777-2808077;2804188
转让收入（万元）：	0	单位属性：
合作完成单位：		已转让企业数（个）：	0
成果发布年份：	2017	知识产权形式：
成果完成人：	陈艳辉;李超柱;陈艳华;张艳军;黄学仁	资源采集日期：	2018-03-20

酶解牡蛎肉制备免疫抑制作用的活性肽与作用机理研究

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