1.任务来源： 本研究为自选项目。我国的细菌耐药监测工作主要集中在临床致病菌和食源性致病菌，对肠道指示菌的系统研究和检测还处于空白。因此，本研究以健康人大肠埃希菌为研究对象，了解耐药现况，基因盒—整合子分布情况及耐药机制。 2.应用领域和技术原理： 公共卫生领域。适用于各级医疗卫生机构、大中专院校、农畜牧业部门开展细菌耐药监测、耐药机理的研究。32型Vitek微生物分析仪和K-B法抗生素敏感性实验；分子生物学法检测整合子在人群携带情况和基因盒种类；脉冲场凝胶电泳技术分子分型，FingprintⅡ软件菌株相关性分析；质粒接合试验和斑点杂交实验研究Ⅰ类整合子耐药机制。 3.性能指标： 150株健康人肠道大肠埃希菌对常用抗生素存在耐药性，5株（3.3％）细菌产ESBLs，83株（55.3％）细菌为多重耐药菌（耐受3种以上抗生素）。Ⅰ类整合子阳性42株（28.0％），150bp～3 000bp8种条带，其中1株细菌含有两个Ⅰ类整合子（1000bp和1700bp），未检测到Ⅱ类整合酶。大小相同的Ⅰ类整合子酶切图谱一致，据此认为序列相同。常见基因盒dfr17（甲氧苄啶耐药基因）aadA5（链霉素—壮观霉素耐药基因）。细菌多重耐药率与整合子携带情况与年龄不相关。PFGE分型只有菌株145和96、菌株T7和71的同源性系数达到90.0％以上为同一基因型，其余菌株均为不同基因型，Ⅰ类整合子可存在于同种或不同基因型菌株中。质粒接合试验有25株菌（59.5％）将Ⅰ类整合子成功传递给受体菌，耐药表形也相应传递，证明耐药质粒含有Ⅰ类整合子。斑点杂交实验位于染色体和非结合性质粒的整合子分别为8株和9株。 4.与国内外同类技术比较： 斑点杂交实验和质粒结合实验的应用，为Ⅰ类整合子的基因定位提供了精确地数据，通过菌株传递基因盒后抗性改变的情况，为细菌耐药机制的研究和新抗生素的开发提供有力证据。 5.创新性、先进性： 1）首次对北京地区健康人大肠埃希菌的耐药情况和基因盒—整合子的分布情况进行系统研究，为国内细菌耐药性研究提供了重要的参考数据。 2）首次采用质粒结合和斑点杂交的试验方法研究细菌耐药机制的传递和表达，耐药基因盒的定位。 3）采用了6大类，21种抗生素进行耐药敏感性测定，包括了传统抗生素和新抗生素，结合临床用药情况及我国畜牧业抗生素使用特点进行确定，较全面的反映了样本的耐药现状。 4）对样本进行年龄分组，发现细菌多重耐药率与整合子携带情况与年龄不相关。 5）PFGE分子分型结合流行病学资料，充分证明了基因盒—整合子的基因分布特点。 6.作用意义： 本课题提示对细菌耐药性的产生及其播散进行溯源，监测健康人肠道大肠埃希菌耐药情况是一个不可忽视的环节，其耐药水平是衡量抗生素选择性压力及致病菌耐药水平的参考指标。获得整合子—基因盒在健康人大肠埃希菌中的分子流行病学资料，为合理解释临床致病菌与食源性致病菌多重耐药性的快速扩散提供理论支持。初步探讨了整合子介导和传播细菌耐药性的分子机理，丰富补充了整合子—基因盒体系，为深入研究细菌耐药性的播散机制、开发新抗生素提供了可靠的参考依据。 7.推广应用前景： 疾病预防控制机构可用本实验方法对辖区健康人群进行耐药基本情况了解和研究，建立耐药监测网络，动态观察社区人群耐药性变迁情况，为指导人们正确使用抗生素进行健康干预。将本地区健康人耐药情况与医疗机构临床致病菌耐药情况进行分析和观察，制定抗生素相关政策，临床感染性疾病的诊断治疗、新抗生素的研发提供基础资料。监测菌群不仅限于大肠埃希菌，可拓展到其它肠杆菌科细菌，食源性肠道致病菌，家畜家禽等的肠道指示菌。

1.任务来源： 本研究为自选项目。我国的细菌耐药监测工作主要集中在临床致病菌和食源性致病菌，对肠道指示菌的系统研究和检测还处于空白。因此，本研究以健康人大肠埃希菌为研究对象，了解耐药现况，基因盒—整合子分布情况及耐药机制。 2.应用领域和技术原理： 公共卫生领域。适用于各级医疗卫生机构、大中专院校、农畜牧业部门开展细菌耐药监测、耐药机理的研究。32型Vitek微生物分析仪和K-B法抗生素敏感性实验；分子生物学法检测整合子在人群携带情况和基因盒种类；脉冲场凝胶电泳技术分子分型，FingprintⅡ软件菌株相关性分析；质粒接合试验和斑点杂交实验研究Ⅰ类整合子耐药机制。 3.性能指标： 150株健康人肠道大肠埃希菌对常用抗生素存在耐药性，5株（3.3％）细菌产ESBLs，83株（55.3％）细菌为多重耐药菌（耐受3种以上抗生素）。Ⅰ类整合子阳性42株（28.0％），150bp～3 000bp8种条带，其中1株细菌含有两个Ⅰ类整合子（1000bp和1700bp），未检测到Ⅱ类整合酶。大小相同的Ⅰ类整合子酶切图谱一致，据此认为序列相同。常见基因盒dfr17（甲氧苄啶耐药基因）aadA5（链霉素—壮观霉素耐药基因）。细菌多重耐药率与整合子携带情况与年龄不相关。PFGE分型只有菌株145和96、菌株T7和71的同源性系数达到90.0％以上为同一基因型，其余菌株均为不同基因型，Ⅰ类整合子可存在于同种或不同基因型菌株中。质粒接合试验有25株菌（59.5％）将Ⅰ类整合子成功传递给受体菌，耐药表形也相应传递，证明耐药质粒含有Ⅰ类整合子。斑点杂交实验位于染色体和非结合性质粒的整合子分别为8株和9株。 4.与国内外同类技术比较： 斑点杂交实验和质粒结合实验的应用，为Ⅰ类整合子的基因定位提供了精确地数据，通过菌株传递基因盒后抗性改变的情况，为细菌耐药机制的研究和新抗生素的开发提供有力证据。 5.创新性、先进性： 1）首次对北京地区健康人大肠埃希菌的耐药情况和基因盒—整合子的分布情况进行系统研究，为国内细菌耐药性研究提供了重要的参考数据。 2）首次采用质粒结合和斑点杂交的试验方法研究细菌耐药机制的传递和表达，耐药基因盒的定位。 3）采用了6大类，21种抗生素进行耐药敏感性测定，包括了传统抗生素和新抗生素，结合临床用药情况及我国畜牧业抗生素使用特点进行确定，较全面的反映了样本的耐药现状。 4）对样本进行年龄分组，发现细菌多重耐药率与整合子携带情况与年龄不相关。 5）PFGE分子分型结合流行病学资料，充分证明了基因盒—整合子的基因分布特点。 6.作用意义： 本课题提示对细菌耐药性的产生及其播散进行溯源，监测健康人肠道大肠埃希菌耐药情况是一个不可忽视的环节，其耐药水平是衡量抗生素选择性压力及致病菌耐药水平的参考指标。获得整合子—基因盒在健康人大肠埃希菌中的分子流行病学资料，为合理解释临床致病菌与食源性致病菌多重耐药性的快速扩散提供理论支持。初步探讨了整合子介导和传播细菌耐药性的分子机理，丰富补充了整合子—基因盒体系，为深入研究细菌耐药性的播散机制、开发新抗生素提供了可靠的参考依据。 7.推广应用前景： 疾病预防控制机构可用本实验方法对辖区健康人群进行耐药基本情况了解和研究，建立耐药监测网络，动态观察社区人群耐药性变迁情况，为指导人们正确使用抗生素进行健康干预。将本地区健康人耐药情况与医疗机构临床致病菌耐药情况进行分析和观察，制定抗生素相关政策，临床感染性疾病的诊断治疗、新抗生素的研发提供基础资料。监测菌群不仅限于大肠埃希菌，可拓展到其它肠杆菌科细菌，食源性肠道致病菌，家畜家禽等的肠道指示菌。