1、任务来源： 　　本课题为石家庄市科技局确定的2005年石家庄市科学技术研究与发展指导计划项目（第一批），项目编号为：05120443。 　　2、应用领域： 　　公共卫生领域。 　　获得性免疫缺陷综合征（AIDS，简称艾滋病）是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染而引起，导致被感染者免疫功能的部分或完全丧失，继而发生机会性感染、肿瘤等，临床表现多种多样的一种传染病，通过性接触、血液途径和母婴传播，已成为全球性的重大公共卫生问题和社会问题。由于HIV病毒在复制过程中缺乏自我校正功能，使其基因组具有高度的变异性，在传播过程中产生许多亚型，形成一定的地区和人群分布特点。通过对HIV基因序列测定，对系统进化树分析，可对病毒株进行分型，追踪传染源，研究毒株的变异规律，为HIV的分子流行病、诊断、临床和药物治疗及其疫苗研制等提供基础资料。 　　3、技术原理： 　　用含0.15﹪EDTA的真空采血管采集HIV-1感染者和病人静脉血5ml，使用德国Qiagen公司DNA Blood Mini Kit提取试剂盒，自全血中提取HIV-1前病毒DNA，用巢式聚合酶链反应（nest-PCR）对env外膜蛋白基因C2-V3区及邻近基因区668个碱基对（bp）进行扩增，PCR产物经1﹪琼脂糖凝胶电泳观察，选取目的片段扩增阳性的PCR产物送往上海生工生物工程技术服务有限公司纯化并测序，用美国Los Alamos国家实验室HIV核酸序列库中提供的基因分型工具BLAST程序结合系统树分析，对得到的序列进行分析，确定HIV-1亚型分布。 　　4、性能指标： 　　共对184名经免疫印迹试验（WB）确认的HIV-1阳性者进行研究，得到148份毒株的测序结果。分属B（欧美B）、B|（泰国B）、C三种亚型和CRF07-BC、CRF01-AE、CRF02-AG、CRF03-AB、CRF11-CPX五种重组亚型。其中B亚型45例占30.41﹪，CRF07-BC37例占25﹪，B|亚型35例占23.65﹪，CRF01-AE25例占16.89﹪，C亚型、CRF02-AG各2例分别占1.35﹪，CRF03-AB、CRF11-CPX各1例分别占0.68﹪。B亚型均为性途径传播，其中同性传播占71.11﹪（32/45），异性传播占28.89﹪（13/45）；CRF07-BC亚型以注射毒品传播为主占72.97﹪（27/37），其次是异性传播占18.92﹪（7/37），同性传播占8.11﹪（3/37）；B|亚型中供受血者占54.29﹪（19/35），3例母婴传播（8.57﹪）均发生在父母有供受血的家庭，供受血者配偶6例占17.14﹪，其他异性传播占20﹪（7/35）；CRF01-AE以同性传播为主占64﹪（16/25），异性传播占32﹪（8/25），还有1例因注射吸毒感染（4﹪）；C亚型的2例感染者中1例为从非洲回国的劳务输出人员，1例为非洲籍的入境人员；CRF02-AG、CRF03-AB和CRF11-CPX亚型的感染者均为来自非洲的外籍人员。目前的主要流行株B、B|、CRF01-AE和CRF07-BC的组内基因离散率分别为12.3﹪、10.6﹪、10.2﹪和8.7﹪，流行时间大约在12～9年之间。 　　5、与国内外同类技术比较： 　　我国于1996～1998年，在全国范围内进行了第一次大规模分子流行病学研究，从除西藏外的30个省、自治区、直辖市共发现了A、B、B|、C、D、E、F、G八种毒株，其中B|亚型占47.5﹪，C亚型占34.3﹪，E亚型占9.6﹪，其余4种占5.7﹪至0.3﹪。2001～2003年我国进行了第二次全国HIV分子流行病学调查，共发现A、B|、B、C、CRF-BC（CRF07-BC、CRF08-BC）、CRF01-AE和CRF02-AG 8种类型的HIV-1亚型。在这8种HIV-1毒株中，CRF-BC亚型占50.20﹪、B|亚型占29.11﹪、CRF01-AE亚型占15.54﹪、B亚型占2.55﹪、A亚型占1.47﹪、C亚型占1.03﹪、CRF02-AG亚型占0.10﹪。第二次流调我国HIV的亚型主要以CRF-BC、B|和CRF01-AE为主（占所有亚型的94.85﹪），与1996～1998年全国HIV分子流调相比，B|亚型已由原来的第一位降至第二位，而CRF-BC亚型则上升为第一位，同时CRF01-AE亚型所占比例也有所增加。 　　本课题研究显示，石家庄市HIV-1主要亚型为B、CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型，与2001～2003年第二次全国HIV分子流行病学调查发现的我国主要以CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型为主相比，HIV-1亚型分布格局发生较大变化，通过性传播、特别是在男男性行为人群中蔓延较快的B亚型成为主要的流行亚型，提示随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，特别是通过男男性行为人群感染人数上升迅速的情况下，应加强对B亚型的监测及其传播力、致病性等方面的研究。　　6、创新性、先进性： 　　①本课题通过对来工作的外籍人员HIV-1感染者基因序列测定发现了国内少见的HIV-1 CRF03-AB和CRF11-CPX亚型； 　　②通过对石家庄市HIV/AIDS亚型分布调查分析，发现最早从劳务回国人员中发现的HIV-1 C亚型并未在人群中传播蔓延； 　　③通过既往采供血感染及其造成的HIV-1传播全部是B|亚型，人群分离现象明显，提示随着非法采供血事件的淡去，该亚型所占的比例会逐渐降低； 　　④本课题研究发现，石家庄市HIV-1流行的主要亚型为B、CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型，比较2001～2003年第二次全国HIV分子流行病学调查我国主要流行在吸毒人员中传播的CRF-BC和在采供血人群中传播的B|的结果，HIV-1亚型分布格局发生了较大变化，通过性传播、特别是在男男性行为人群中蔓延较快的B亚型成为主要的流行亚型，提示随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，特别是通过男男性行为人群感染人数上升迅速的情况下，应开展第三次全国性的分子流行病学调查，了解目前我国流行的主要HIV-1亚型，并针对主要毒株进行感染力、免疫原性和传播能力的研究。 　　7、作用意义通过本课题研究，了解了石家庄市HIV-1流行毒株的亚型分布，追踪到传染来源和传入时间，为制定相应的防控策略提供了技术资料。 　　推广范围本课题研究成果适宜在全国推广。 　　推广前景通过对HIV/AIDS进行基因序列测定，可以及时了解特定地区或特定人群的HIV亚型分布，追溯传染来源，对流行病学、临床诊断、药物治疗和疫苗研究等提供基础资料。 　　推广措施： 　　①及时对新发现的HIV/AIDS进行分子流行病学调查，掌握HIV传播的主要流行株和流行变化趋势，特别是随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，应加强对HIV-1 B亚型和CRF01-AE的监测及其病原学、传播力、致病性等基础性研究； 　　②开展HIV/AIDS溯源调查，分析HIV-1传播力与毒株分型及其他因素之间的关系和规律；　　③通过对发现的HIV/AIDS追踪随访和基因序列测定，了解不同亚型毒株在个体内的变异速度等情况，探索不同亚型与致病能力、机会性感染和病程进展之间的关系； 　　④加强对HIV/AIDS的宣传教育、随访管理，规范开展抗病毒治疗，防治疾病的蔓延传播；　　⑤大力开展预防控制艾滋病的宣传教育，通过主流媒体和深入社区的宣传和活动，提高广大市民的艾滋病防治知识知晓率，增强防病意识和防病能力； 　　⑥加大艾滋病高危行为干预工作的力度和广度，深入到高危场所，对艾滋病的高危人群如暗娼、男男性行为者、注射吸毒人员等进行持续的、不间断的面对面宣传和行为干预，提高他们抵御疾病的自觉性和主动参与意识，在高危场所全面推广使用安全套。

　　1、任务来源： 　　本课题为石家庄市科技局确定的2005年石家庄市科学技术研究与发展指导计划项目（第一批），项目编号为：05120443。 　　2、应用领域： 　　公共卫生领域。 　　获得性免疫缺陷综合征（AIDS，简称艾滋病）是由人免疫缺陷病毒（HIV）感染而引起，导致被感染者免疫功能的部分或完全丧失，继而发生机会性感染、肿瘤等，临床表现多种多样的一种传染病，通过性接触、血液途径和母婴传播，已成为全球性的重大公共卫生问题和社会问题。由于HIV病毒在复制过程中缺乏自我校正功能，使其基因组具有高度的变异性，在传播过程中产生许多亚型，形成一定的地区和人群分布特点。通过对HIV基因序列测定，对系统进化树分析，可对病毒株进行分型，追踪传染源，研究毒株的变异规律，为HIV的分子流行病、诊断、临床和药物治疗及其疫苗研制等提供基础资料。 　　3、技术原理： 　　用含0.15﹪EDTA的真空采血管采集HIV-1感染者和病人静脉血5ml，使用德国Qiagen公司DNA Blood Mini Kit提取试剂盒，自全血中提取HIV-1前病毒DNA，用巢式聚合酶链反应（nest-PCR）对env外膜蛋白基因C2-V3区及邻近基因区668个碱基对（bp）进行扩增，PCR产物经1﹪琼脂糖凝胶电泳观察，选取目的片段扩增阳性的PCR产物送往上海生工生物工程技术服务有限公司纯化并测序，用美国Los Alamos国家实验室HIV核酸序列库中提供的基因分型工具BLAST程序结合系统树分析，对得到的序列进行分析，确定HIV-1亚型分布。 　　4、性能指标： 　　共对184名经免疫印迹试验（WB）确认的HIV-1阳性者进行研究，得到148份毒株的测序结果。分属B（欧美B）、B|（泰国B）、C三种亚型和CRF07-BC、CRF01-AE、CRF02-AG、CRF03-AB、CRF11-CPX五种重组亚型。其中B亚型45例占30.41﹪，CRF07-BC37例占25﹪，B|亚型35例占23.65﹪，CRF01-AE25例占16.89﹪，C亚型、CRF02-AG各2例分别占1.35﹪，CRF03-AB、CRF11-CPX各1例分别占0.68﹪。B亚型均为性途径传播，其中同性传播占71.11﹪（32/45），异性传播占28.89﹪（13/45）；CRF07-BC亚型以注射毒品传播为主占72.97﹪（27/37），其次是异性传播占18.92﹪（7/37），同性传播占8.11﹪（3/37）；B|亚型中供受血者占54.29﹪（19/35），3例母婴传播（8.57﹪）均发生在父母有供受血的家庭，供受血者配偶6例占17.14﹪，其他异性传播占20﹪（7/35）；CRF01-AE以同性传播为主占64﹪（16/25），异性传播占32﹪（8/25），还有1例因注射吸毒感染（4﹪）；C亚型的2例感染者中1例为从非洲回国的劳务输出人员，1例为非洲籍的入境人员；CRF02-AG、CRF03-AB和CRF11-CPX亚型的感染者均为来自非洲的外籍人员。目前的主要流行株B、B|、CRF01-AE和CRF07-BC的组内基因离散率分别为12.3﹪、10.6﹪、10.2﹪和8.7﹪，流行时间大约在12～9年之间。 　　5、与国内外同类技术比较： 　　我国于1996～1998年，在全国范围内进行了第一次大规模分子流行病学研究，从除西藏外的30个省、自治区、直辖市共发现了A、B、B|、C、D、E、F、G八种毒株，其中B|亚型占47.5﹪，C亚型占34.3﹪，E亚型占9.6﹪，其余4种占5.7﹪至0.3﹪。2001～2003年我国进行了第二次全国HIV分子流行病学调查，共发现A、B|、B、C、CRF-BC（CRF07-BC、CRF08-BC）、CRF01-AE和CRF02-AG 8种类型的HIV-1亚型。在这8种HIV-1毒株中，CRF-BC亚型占50.20﹪、B|亚型占29.11﹪、CRF01-AE亚型占15.54﹪、B亚型占2.55﹪、A亚型占1.47﹪、C亚型占1.03﹪、CRF02-AG亚型占0.10﹪。第二次流调我国HIV的亚型主要以CRF-BC、B|和CRF01-AE为主（占所有亚型的94.85﹪），与1996～1998年全国HIV分子流调相比，B|亚型已由原来的第一位降至第二位，而CRF-BC亚型则上升为第一位，同时CRF01-AE亚型所占比例也有所增加。 　　本课题研究显示，石家庄市HIV-1主要亚型为B、CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型，与2001～2003年第二次全国HIV分子流行病学调查发现的我国主要以CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型为主相比，HIV-1亚型分布格局发生较大变化，通过性传播、特别是在男男性行为人群中蔓延较快的B亚型成为主要的流行亚型，提示随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，特别是通过男男性行为人群感染人数上升迅速的情况下，应加强对B亚型的监测及其传播力、致病性等方面的研究。　　6、创新性、先进性： 　　①本课题通过对来工作的外籍人员HIV-1感染者基因序列测定发现了国内少见的HIV-1 CRF03-AB和CRF11-CPX亚型； 　　②通过对石家庄市HIV/AIDS亚型分布调查分析，发现最早从劳务回国人员中发现的HIV-1 C亚型并未在人群中传播蔓延； 　　③通过既往采供血感染及其造成的HIV-1传播全部是B|亚型，人群分离现象明显，提示随着非法采供血事件的淡去，该亚型所占的比例会逐渐降低； 　　④本课题研究发现，石家庄市HIV-1流行的主要亚型为B、CRF-BC、B|和CRF01-AE亚型，比较2001～2003年第二次全国HIV分子流行病学调查我国主要流行在吸毒人员中传播的CRF-BC和在采供血人群中传播的B|的结果，HIV-1亚型分布格局发生了较大变化，通过性传播、特别是在男男性行为人群中蔓延较快的B亚型成为主要的流行亚型，提示随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，特别是通过男男性行为人群感染人数上升迅速的情况下，应开展第三次全国性的分子流行病学调查，了解目前我国流行的主要HIV-1亚型，并针对主要毒株进行感染力、免疫原性和传播能力的研究。 　　7、作用意义通过本课题研究，了解了石家庄市HIV-1流行毒株的亚型分布，追踪到传染来源和传入时间，为制定相应的防控策略提供了技术资料。 　　推广范围本课题研究成果适宜在全国推广。 　　推广前景通过对HIV/AIDS进行基因序列测定，可以及时了解特定地区或特定人群的HIV亚型分布，追溯传染来源，对流行病学、临床诊断、药物治疗和疫苗研究等提供基础资料。 　　推广措施： 　　①及时对新发现的HIV/AIDS进行分子流行病学调查，掌握HIV传播的主要流行株和流行变化趋势，特别是随着我国HIV流行趋势转为以性传播为主，应加强对HIV-1 B亚型和CRF01-AE的监测及其病原学、传播力、致病性等基础性研究； 　　②开展HIV/AIDS溯源调查，分析HIV-1传播力与毒株分型及其他因素之间的关系和规律；　　③通过对发现的HIV/AIDS追踪随访和基因序列测定，了解不同亚型毒株在个体内的变异速度等情况，探索不同亚型与致病能力、机会性感染和病程进展之间的关系； 　　④加强对HIV/AIDS的宣传教育、随访管理，规范开展抗病毒治疗，防治疾病的蔓延传播；　　⑤大力开展预防控制艾滋病的宣传教育，通过主流媒体和深入社区的宣传和活动，提高广大市民的艾滋病防治知识知晓率，增强防病意识和防病能力； 　　⑥加大艾滋病高危行为干预工作的力度和广度，深入到高危场所，对艾滋病的高危人群如暗娼、男男性行为者、注射吸毒人员等进行持续的、不间断的面对面宣传和行为干预，提高他们抵御疾病的自觉性和主动参与意识，在高危场所全面推广使用安全套。