本研究来源于重庆市卫生局重点项目（渝卫教[2007]1号文 07-1-007）。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)为定植于人胃黏膜的一种微需氧、螺旋状的革兰阴性杆菌，由于Hp的感染率极高，预防和治疗Hp感染成为消化领域和医学微生物界的研究热点。目前常用的治疗方案是抗生素加质子泵抑制剂或／及铋剂的“三联”、“四联”疗法，但药物治疗存在一定的不良反应，停药后易复发，治疗费用较高，患者依从性差及耐药菌株的不断增加等问题使其发展受到限制，而疫苗将是预防和治疗Hp感染最经济有效的方法。Hp蛋白疫苗的免疫原性较低，只有与各种强效的免疫佐剂一起接种时才具有保护作用，但这些佐剂存在较大的毒副作用而限制了其进一步发展，而重组活载体疫苗可有效解决这一难题。Hp活载体疫苗为预防和治疗Hp感染提供了一种新的策略。 　　耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，M.s）是一类来源于土壤的快速生长型分枝杆菌，1～3 h繁殖一代，耻垢分枝杆菌既是一种非致病菌又是一种有效的细胞免疫佐剂，随着研究的深入，很多外源蛋白在耻垢分枝杆菌中获得了表达，并具有较好的免疫效果。这为研究Hp活载体疫苗提供了新的途径。 　　本研究构建了Hp重组耻垢分枝杆菌活载体疫苗，在小鼠模型中评价其对Hp感染的免疫保护作用，并对其免疫保护机制进行了探讨。 　　（1）首次将HpOmp26与Omp18基因插入到大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表达载体中，利用电穿孔的方法将表达载体导入M.S中，构建非分泌表达和分泌表达Hp Omp26与Omp18的活载体疫苗。 　　（2）首次采用共转化表达绿色荧光蛋白的方式构建重组疫苗株，利用绿色荧光蛋白作为活细胞分子探针，研究重组疫苗在体内外的稳定性及安全性。 　　（3）首次将该重组疫苗灌胃免疫BLAB/c小鼠，研究其免疫保护效果及机理。 　　（4）该疫苗具有毒副作用小，安全；生产工艺简单，不需要纯化；成本低；本身是很强的免疫佐剂；一次性接种，能在小鼠体内存活，不断产生特异性抗原，诱导细胞免疫和体液免疫；随着时间的延长，机体可以清除细菌等优点。是一种理想、高效、特异的疫苗。此研究在国内外尚未见报道。 　　本研究共撰写论文12篇，已发表11篇，其中一篇发表在SCI上，影响因子高达3.373，其余均在《第三军医大学学报》、《中国生物制品学杂志》、《中华微生物学与免疫学杂志》等CSCD核心期刊上发表。本课题组通过重庆市消化学会组织学术会议交流等方式，将该技术及研究成果在全市进行推广应用。并且通过中华医学会组织的第八次全国消化疾病学术会议交流等方式，将该成果在全国范围内推广。本研究首次构建了稳定的Hp重组M.S活载体疫苗，并对其体内外稳定性及接种后体内定植、安全性、免疫保护效果及其可能的机制进行了探索，通过论文的发表和会议交流，为进一步研究开发Hp新型疫苗供了理论和实验依据。

　　本研究来源于重庆市卫生局重点项目（渝卫教[2007]1号文 07-1-007）。幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)为定植于人胃黏膜的一种微需氧、螺旋状的革兰阴性杆菌，由于Hp的感染率极高，预防和治疗Hp感染成为消化领域和医学微生物界的研究热点。目前常用的治疗方案是抗生素加质子泵抑制剂或／及铋剂的“三联”、“四联”疗法，但药物治疗存在一定的不良反应，停药后易复发，治疗费用较高，患者依从性差及耐药菌株的不断增加等问题使其发展受到限制，而疫苗将是预防和治疗Hp感染最经济有效的方法。Hp蛋白疫苗的免疫原性较低，只有与各种强效的免疫佐剂一起接种时才具有保护作用，但这些佐剂存在较大的毒副作用而限制了其进一步发展，而重组活载体疫苗可有效解决这一难题。Hp活载体疫苗为预防和治疗Hp感染提供了一种新的策略。 　　耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis，M.s）是一类来源于土壤的快速生长型分枝杆菌，1～3 h繁殖一代，耻垢分枝杆菌既是一种非致病菌又是一种有效的细胞免疫佐剂，随着研究的深入，很多外源蛋白在耻垢分枝杆菌中获得了表达，并具有较好的免疫效果。这为研究Hp活载体疫苗提供了新的途径。 　　本研究构建了Hp重组耻垢分枝杆菌活载体疫苗，在小鼠模型中评价其对Hp感染的免疫保护作用，并对其免疫保护机制进行了探讨。 　　（1）首次将HpOmp26与Omp18基因插入到大肠杆菌－分枝杆菌穿梭表达载体中，利用电穿孔的方法将表达载体导入M.S中，构建非分泌表达和分泌表达Hp Omp26与Omp18的活载体疫苗。 　　（2）首次采用共转化表达绿色荧光蛋白的方式构建重组疫苗株，利用绿色荧光蛋白作为活细胞分子探针，研究重组疫苗在体内外的稳定性及安全性。 　　（3）首次将该重组疫苗灌胃免疫BLAB/c小鼠，研究其免疫保护效果及机理。 　　（4）该疫苗具有毒副作用小，安全；生产工艺简单，不需要纯化；成本低；本身是很强的免疫佐剂；一次性接种，能在小鼠体内存活，不断产生特异性抗原，诱导细胞免疫和体液免疫；随着时间的延长，机体可以清除细菌等优点。是一种理想、高效、特异的疫苗。此研究在国内外尚未见报道。 　　本研究共撰写论文12篇，已发表11篇，其中一篇发表在SCI上，影响因子高达3.373，其余均在《第三军医大学学报》、《中国生物制品学杂志》、《中华微生物学与免疫学杂志》等CSCD核心期刊上发表。本课题组通过重庆市消化学会组织学术会议交流等方式，将该技术及研究成果在全市进行推广应用。并且通过中华医学会组织的第八次全国消化疾病学术会议交流等方式，将该成果在全国范围内推广。本研究首次构建了稳定的Hp重组M.S活载体疫苗，并对其体内外稳定性及接种后体内定植、安全性、免疫保护效果及其可能的机制进行了探索，通过论文的发表和会议交流，为进一步研究开发Hp新型疫苗供了理论和实验依据。