①课题来源与背景：上海市卫生局 　　②技术原理及性能指标：建立体外胚胎干细胞向血管内皮细胞定向分化程序： 　　1.胚胎干细胞（H39）的传代培养： 　　（1）制备小鼠成纤维细胞饲养层 　　（2）胚胎干细胞（H39）的体外扩大培养 　　2.体外诱导分化及检测： 　　（1）诱导分化 　　（2）细胞收集以及免疫组织化学染色 　　3.体内诱导分化及检测： 　　4.缺血组织血管新生/再生的检测： 　　（1）激光多普勒血流仪检测双下肢血流比值（未作） 　　（2）下肢血管造影术 　　（3）测定下肢肌肉内毛细血管密度 　　（4）流式细胞分析内皮祖细胞（尚未获得稳定的数据） 　　（5）测定组织中的NOx，cGMP的含量 　　③技术的创造性与先进性：积极治疗缺血性疾病对于减少其并发症的发生，减少医疗费用，对于延长寿命，提高人民群众的生活质量有着重要的意义。干细胞移植为缺血性疾病的治疗提供了一条有效地途径。 　　④技术的成熟程度，适用范围和安全性：项目已完成情况如下： 　　1.胚胎干细胞的传代培养 　　（1）制备小鼠成纤维细胞饲养层 　　（2）胚胎干细胞的体外扩大培养 　　2.体外诱导分化及检测 　　（1）诱导分化 　　（2）细胞收集及免疫组化染色：ALU染色（+），X-GEL染色（+） 　　（3）体内诱导分化及检测：细胞免疫组化染色：VWF荧光染色（+），HOETHEST染色（+） 　　3.缺血组织血管新生/再生的检测 　　（1）激光多普勒血流仪检测双下肢血流比值（未作） 　　（2）下肢血管造影术：对照组：3.01+/-1.96 移植组：3.96+/-0.27 　　（3）测定下肢肌肉内毛细血管密度：对照组：30+/-2.4 移植组：33+/-6.8 　　（4）流式细胞分析内皮祖细胞（尚未获得稳定的数据） 　　（5）测定组织中的NOx，cGMP的含量：Tissue NOx(nmol/g tissue)：对照组：18+/-2.5 移植组：23+/-3.2 　　Tissue cGMP(fmol/g tissue)：对照组：43+/-5 移植组：55+/-7 　　⑤应用情况及存在的问题：干细胞移植为缺血性疾病的治疗提供了一条有效途径。 　　⑥历年获奖情况：段俊丽等。甲基四氢叶酸对高胆固醇大鼠下肢缺血的改善作用：上海交通大学学报（医学版）2008：1。 　　陶蕊，段俊丽等。内皮祖细胞对血管新生的影响及他丁的干预作用。国外医学老年学分册，2007，28（6）：267～271。 　　刘蓓菁，段俊丽等。同型半胱氨酸对冠心病外周血管内皮祖细胞的研究现状。国外医学老年学分册，2007，28（5）：203～206。 　　陶蕊，段俊丽等。辛伐他丁对糖尿病缺血后血管新生的影响。临床诊断学杂志。 　　刘蓓菁，段俊丽等。高同型半胱氨酸血症对大鼠缺血性病变的影响。心脏杂志。

　　①课题来源与背景：上海市卫生局 　　②技术原理及性能指标：建立体外胚胎干细胞向血管内皮细胞定向分化程序： 　　1.胚胎干细胞（H39）的传代培养： 　　（1）制备小鼠成纤维细胞饲养层 　　（2）胚胎干细胞（H39）的体外扩大培养 　　2.体外诱导分化及检测： 　　（1）诱导分化 　　（2）细胞收集以及免疫组织化学染色 　　3.体内诱导分化及检测： 　　4.缺血组织血管新生/再生的检测： 　　（1）激光多普勒血流仪检测双下肢血流比值（未作） 　　（2）下肢血管造影术 　　（3）测定下肢肌肉内毛细血管密度 　　（4）流式细胞分析内皮祖细胞（尚未获得稳定的数据） 　　（5）测定组织中的NOx，cGMP的含量 　　③技术的创造性与先进性：积极治疗缺血性疾病对于减少其并发症的发生，减少医疗费用，对于延长寿命，提高人民群众的生活质量有着重要的意义。干细胞移植为缺血性疾病的治疗提供了一条有效地途径。 　　④技术的成熟程度，适用范围和安全性：项目已完成情况如下： 　　1.胚胎干细胞的传代培养 　　（1）制备小鼠成纤维细胞饲养层 　　（2）胚胎干细胞的体外扩大培养 　　2.体外诱导分化及检测 　　（1）诱导分化 　　（2）细胞收集及免疫组化染色：ALU染色（+），X-GEL染色（+） 　　（3）体内诱导分化及检测：细胞免疫组化染色：VWF荧光染色（+），HOETHEST染色（+） 　　3.缺血组织血管新生/再生的检测 　　（1）激光多普勒血流仪检测双下肢血流比值（未作） 　　（2）下肢血管造影术：对照组：3.01+/-1.96 移植组：3.96+/-0.27 　　（3）测定下肢肌肉内毛细血管密度：对照组：30+/-2.4 移植组：33+/-6.8 　　（4）流式细胞分析内皮祖细胞（尚未获得稳定的数据） 　　（5）测定组织中的NOx，cGMP的含量：Tissue NOx(nmol/g tissue)：对照组：18+/-2.5 移植组：23+/-3.2 　　Tissue cGMP(fmol/g tissue)：对照组：43+/-5 移植组：55+/-7 　　⑤应用情况及存在的问题：干细胞移植为缺血性疾病的治疗提供了一条有效途径。 　　⑥历年获奖情况：段俊丽等。甲基四氢叶酸对高胆固醇大鼠下肢缺血的改善作用：上海交通大学学报（医学版）2008：1。 　　陶蕊，段俊丽等。内皮祖细胞对血管新生的影响及他丁的干预作用。国外医学老年学分册，2007，28（6）：267～271。 　　刘蓓菁，段俊丽等。同型半胱氨酸对冠心病外周血管内皮祖细胞的研究现状。国外医学老年学分册，2007，28（5）：203～206。 　　陶蕊，段俊丽等。辛伐他丁对糖尿病缺血后血管新生的影响。临床诊断学杂志。 　　刘蓓菁，段俊丽等。高同型半胱氨酸血症对大鼠缺血性病变的影响。心脏杂志。