1、该项目2005年11月被江西省卫生厅科教处列为立项项目；2010年4月21日由江西省卫生厅组织的专家组对该项目进行了科技成果鉴定。 　　2、乙胺丁醇（EMB）对结核分枝杆菌的作用机制与分枝杆菌胞壁结构破坏有关，主要作用于靶分子阿拉伯糖基转移酶，抑制了阿拉伯糖基聚合入阿拉伯半乳聚糖，从而影响细胞壁分枝菌酸－阿拉伯半乳聚糖－肽聚糖复合物的形成，导致菌细胞的死亡。而embB基因突变主要表现在306位密码子突变，是耐EMB产生的主要机制。 　　3、传统的结核分枝杆菌培养和药敏试验不仅耗时长（一般需6～8周，甚至更长），在药物敏感性方面也存在一定问题。因而几乎不能为有效药物的选择提供有价值的信息。而且痰涂片阴性培养阴性（简称涂阴培阴）活动性肺结核患者对乙胺丁醇的耐药状况至今未见报道。本研究拟采用套式PCR直接扩增痰标本中结核分枝杆菌embB基因，再取扩增产物测序以确定embB基因是否发生突变以及准确的突变位点，从而快速判断其对乙胺丁醇的耐药性，将有利于临床医生及时选择有效的抗结核药物进行治疗，同时也为医生对菌阴活动性肺结核患者的临床用药提供参考。 　　4、采用套式PCR扩增技术及测序法直接检测130例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌embB基因突变情况，同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养、菌型鉴定及药敏试验。130例活动性肺结核患者痰标本抗酸染色阳性38例，阳性率为29.2﹪(38/130)；罗氏培养阳性为79例，阳性率为60.8﹪(79/130)。79例培养阳性痰标本中耐乙胺丁醇29例，其中有18例在embB基因met306ATG突变，基因突变率为62.1﹪。20例非结核肺部疾病患者痰标本和5株非结核分枝杆菌菌株经套式PCR扩增全部为阴性，特异性为100﹪。7例涂阴培阴PCR扩增阳性的序列中有1例在embB基因306位密码了发生突变。结论：套式PCR结合测序法可望成为一种快速、特异、准确地检测痰标本中embB基因突变导致的耐EMB结核分枝杆菌的可行方法。 　　5、该项目的创新之处：采用套式PCR扩增及DNA测序直接检测患者痰标本中结核分枝杆菌embB基因是否发生突变，以判断结核分枝杆菌是否对乙胺丁醇耐药，该方法具有快速、特异、准确的特点；同时通过检测菌阴活动性肺结核患者痰中结核分枝杆菌embB基因突变，可以判断乙胺丁醇的耐药性。该技术安全、可靠，适合我省结核病疫情现况，在全省推广应用可行性强。

　　1、该项目2005年11月被江西省卫生厅科教处列为立项项目；2010年4月21日由江西省卫生厅组织的专家组对该项目进行了科技成果鉴定。 　　2、乙胺丁醇（EMB）对结核分枝杆菌的作用机制与分枝杆菌胞壁结构破坏有关，主要作用于靶分子阿拉伯糖基转移酶，抑制了阿拉伯糖基聚合入阿拉伯半乳聚糖，从而影响细胞壁分枝菌酸－阿拉伯半乳聚糖－肽聚糖复合物的形成，导致菌细胞的死亡。而embB基因突变主要表现在306位密码子突变，是耐EMB产生的主要机制。 　　3、传统的结核分枝杆菌培养和药敏试验不仅耗时长（一般需6～8周，甚至更长），在药物敏感性方面也存在一定问题。因而几乎不能为有效药物的选择提供有价值的信息。而且痰涂片阴性培养阴性（简称涂阴培阴）活动性肺结核患者对乙胺丁醇的耐药状况至今未见报道。本研究拟采用套式PCR直接扩增痰标本中结核分枝杆菌embB基因，再取扩增产物测序以确定embB基因是否发生突变以及准确的突变位点，从而快速判断其对乙胺丁醇的耐药性，将有利于临床医生及时选择有效的抗结核药物进行治疗，同时也为医生对菌阴活动性肺结核患者的临床用药提供参考。 　　4、采用套式PCR扩增技术及测序法直接检测130例活动性肺结核患者和20例非结核性肺部疾病患者痰标本中结核分枝杆菌embB基因突变情况，同份痰标本同时做涂片抗酸染色、罗氏培养、菌型鉴定及药敏试验。130例活动性肺结核患者痰标本抗酸染色阳性38例，阳性率为29.2﹪(38/130)；罗氏培养阳性为79例，阳性率为60.8﹪(79/130)。79例培养阳性痰标本中耐乙胺丁醇29例，其中有18例在embB基因met306ATG突变，基因突变率为62.1﹪。20例非结核肺部疾病患者痰标本和5株非结核分枝杆菌菌株经套式PCR扩增全部为阴性，特异性为100﹪。7例涂阴培阴PCR扩增阳性的序列中有1例在embB基因306位密码了发生突变。结论：套式PCR结合测序法可望成为一种快速、特异、准确地检测痰标本中embB基因突变导致的耐EMB结核分枝杆菌的可行方法。 　　5、该项目的创新之处：采用套式PCR扩增及DNA测序直接检测患者痰标本中结核分枝杆菌embB基因是否发生突变，以判断结核分枝杆菌是否对乙胺丁醇耐药，该方法具有快速、特异、准确的特点；同时通过检测菌阴活动性肺结核患者痰中结核分枝杆菌embB基因突变，可以判断乙胺丁醇的耐药性。该技术安全、可靠，适合我省结核病疫情现况，在全省推广应用可行性强。