神经细胞损伤后不能再生，神经功能恢复差，其治疗方法一直是人们研究的主要问题之一。神经细胞的移植给神经细胞的治疗损伤带来希望，但自体神经细胞来源困难限制了它的临床应用。研究表明，骨髓间充质干细胞(MSCs)具有多潜能性，可以分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞以及神经细胞等，它从自体骨髓取材，自体应用无免疫排斥反应，可在体外扩增，具有广阔的应用前景。本实验探讨三磷酸腺苷(ATP)对兔骨髓间充质干细胞在体外向神经细胞转化的影响，为临床应用MSCs对神经细胞损伤的治疗奠定理论基础。 主要研究内容和方法： 1.骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定：选用5月龄青紫蓝兔为实验动物。自髂棘处抽取骨髓，密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞(MSCs)，并对所培养细胞进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定。 2.体外诱导MSCs分化及诱导细胞的免疫细胞化学染色：取体外传代培养的第3代MSCs，以1.0×104个/mL的细胞浓度接种于6孔培养板中，细胞贴壁后加入50μg/mL的ATP液，在温度37℃、5﹪CO2气浓度、100﹪饱和湿度条件的培养箱中培养，2d后终止培养。4﹪多聚甲醛液固定，培养过程中倒置显微镜观察细胞的形态学变化。采用免疫细胞化学ABC法染色。 实验结果： 1.对所培养细胞进行细胞免疫化学鉴定发现，MSCs特异性抗原CD44阳性，造血干细胞特异性抗原CD34抗体为阴性表达。 2.加入ATP 12h后部分细胞的梭形形态出现变化，趋向圆形，且细胞有突起出现，呈现双极和多极形态，部分细胞突起增多，且交织成网状。诱导24h后就有Nestin、NSE免疫反应阳性细胞出现，48h后阳性细胞数较多，亦有少数呈GFAP免疫反应阳性。而未分化的梭形细胞以上抗体染色着色不明显。 结论： 在本实验中，应用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞(MSCs)，进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定为骨髓间充质干细胞；将第三代培养的MSCs加入50μg/mL的ATP液，采用免疫细胞化学ABC法染色鉴定分化为神经细胞。 本实验方法的结果证明：(1)应用密度梯度离心法和贴壁筛选法能够获得骨髓间充质干细胞；(2)三磷酸腺苷可以作为诱导剂使骨髓间充质干细胞分化为神经细胞；(3)三磷酸腺苷可以作为修复视神经细胞的药物；(4)骨髓间充质干细胞可以作为修复视神经细胞的种子细胞。 本研究的推广应用：需进一步进行干细胞的移植实验；需建立配套的实验、治疗室；需患者观念的革新及配合；还需相关的制度建立和政府的资助及支持。

神经细胞损伤后不能再生，神经功能恢复差，其治疗方法一直是人们研究的主要问题之一。神经细胞的移植给神经细胞的治疗损伤带来希望，但自体神经细胞来源困难限制了它的临床应用。研究表明，骨髓间充质干细胞(MSCs)具有多潜能性，可以分化为成骨细胞、软骨细胞、心肌细胞、肝细胞以及神经细胞等，它从自体骨髓取材，自体应用无免疫排斥反应，可在体外扩增，具有广阔的应用前景。本实验探讨三磷酸腺苷(ATP)对兔骨髓间充质干细胞在体外向神经细胞转化的影响，为临床应用MSCs对神经细胞损伤的治疗奠定理论基础。 主要研究内容和方法： 1.骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定：选用5月龄青紫蓝兔为实验动物。自髂棘处抽取骨髓，密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞(MSCs)，并对所培养细胞进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定。 2.体外诱导MSCs分化及诱导细胞的免疫细胞化学染色：取体外传代培养的第3代MSCs，以1.0×104个/mL的细胞浓度接种于6孔培养板中，细胞贴壁后加入50μg/mL的ATP液，在温度37℃、5﹪CO2气浓度、100﹪饱和湿度条件的培养箱中培养，2d后终止培养。4﹪多聚甲醛液固定，培养过程中倒置显微镜观察细胞的形态学变化。采用免疫细胞化学ABC法染色。 实验结果： 1.对所培养细胞进行细胞免疫化学鉴定发现，MSCs特异性抗原CD44阳性，造血干细胞特异性抗原CD34抗体为阴性表达。 2.加入ATP 12h后部分细胞的梭形形态出现变化，趋向圆形，且细胞有突起出现，呈现双极和多极形态，部分细胞突起增多，且交织成网状。诱导24h后就有Nestin、NSE免疫反应阳性细胞出现，48h后阳性细胞数较多，亦有少数呈GFAP免疫反应阳性。而未分化的梭形细胞以上抗体染色着色不明显。 结论： 在本实验中，应用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养和扩增获得的骨髓间充质干细胞(MSCs)，进行CD44、CD34细胞免疫化学鉴定为骨髓间充质干细胞；将第三代培养的MSCs加入50μg/mL的ATP液，采用免疫细胞化学ABC法染色鉴定分化为神经细胞。 本实验方法的结果证明：(1)应用密度梯度离心法和贴壁筛选法能够获得骨髓间充质干细胞；(2)三磷酸腺苷可以作为诱导剂使骨髓间充质干细胞分化为神经细胞；(3)三磷酸腺苷可以作为修复视神经细胞的药物；(4)骨髓间充质干细胞可以作为修复视神经细胞的种子细胞。 本研究的推广应用：需进一步进行干细胞的移植实验；需建立配套的实验、治疗室；需患者观念的革新及配合；还需相关的制度建立和政府的资助及支持。