| 成果基本信息 | ||||||
| 关键词: | DNA测序;HLA组织配型;造血干细胞;骨髓库 | |||||
| 成果类别: | 应用技术 | 技术成熟度: | 成熟应用阶段 | |||
| 体现形式(基础理论类): | / | 体现形式(应用技术类): | 新技术 | |||
| 成果登记号: | 9412009Y0160 | 资源采集日期: | 10-2-10 | |||
| 研究情况 | |||||
| 单位名称: | 河南省红十字血液中心 | 技术水平: | 国内领先 | ||
| 评价证书号: | 豫科鉴委字[2008]第1096号 | 评价单位: | 河南省科学技术厅 | ||
| 评价日期: | 2008.12.31 | 评价证书号: | 豫科鉴委字[2008]第1096号 | ||
| 转化情况 | |||||
| 转让范围: | 不转让 | 推广形式: | 其他 | ||
| 已转让企业数(个): | 0 | ||||
| 联系方式 | |||||
| 联系人(平台): | 孵化基地 | 联系人(平台)电话: | 0771-3394012 | ||
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| 成果简介 | |||||
1992年,中国造血干细胞捐献者资料库(中华骨髓库)建立,直到2000年,近10年的时间库容量还不足5万人,而此时,美国的库容量已达500多万,台湾地区也达到了20多万,并且先后为大陆病人提供了近100份造血干细胞,用于白血病救治。中国每年新增白血病患者约400余万人,45﹪以上为16岁以下的青少年儿童,等待通过干细胞移植而获得新生命。2002年国家重新启动了资料库建设工作,由中国红十字总会和卫生部共同负责,并于2003~2010年获得国家彩票公益金的支持,力争在2010年前建成一个100万人份的资料库。目前,中华骨髓库在全国建立了31个省级分库、认定了29个定点HLA组织配型实验室、4个高分辨实验室和1个质量控制实验室;可用于为患者检索服务的HLA分型资料90多万份;与国内外百余家医院建立了业务联系,1100多位志愿者捐献了造血干细胞,其中为境外患者捐献造血干细胞50多份。 河南分库HLA定点组织配型实验室设立于河南省血液中心,是第一批通过国家验收的8个定点实验室之一。实验室从2003成立至今,每年承担约10000人份造血干细胞捐献者血样的HLA配型检测任务,目前已完成检测任务5万余人份,每年参加国家室间质控和2﹪入库结果抽检各两次,合格率分别为100﹪和99﹪以上,高标准达到了国家质量要求。 中原大地是华夏文明的发源地,河南分库资料与患者HLA配型成功率一直处于国内前列,截止2008年12月,中低分辨配型成功已有1100多例,高分辨配型成功并为国内外患者提供造血干细胞100例。5年来,实验室按照中华骨髓库持续发展的有关规定,结合实际检测任务的需要,先后采用了PCR-SSP、PCR-SSO杂交条方法、PCR-SSO基因芯片方法和PCR-SSO流式磁珠方法等分子生物学技术,进行HLA-A、B、DR 共3个位点的分型检测,由于检测方法的持续改进,满足了国家对检测通量和检测精度持续提高的要求,为更多的患者提供了配型检索的机会,减轻了患者的经济负担,节约了国家的医疗资源。 同时,实验室还对检测数据进行了统计分析,建立了河南人群的HLA基因多态性和单倍型数据库,丰富了人类遗传学研究的基础数据信息。另外,实验室利用现有的资源,积极与医疗单位开展HLA与疾病的相关性研究,如HLA-B27亚型与强直性脊柱炎、HLA与精神分裂症、HLA与斑秃的关联研究等,为疾病的进一步预防、治疗提供了丰富的数据。 早期的移植由于不进行HLA配型,多数移植出现严重的排异反应。1964年开始使用血清学方法进行HLA分型检测,由于血清学方法存在较多的交叉反应和宽特异性反应,所以逐渐为分子生物学方法所取代。目前国际通用的HLA分型方法主要有PCR-SSP、PCR-SSO杂交条方法、PCR-SSO荧光微珠流式检测法、SSO正向杂交基因芯片及DNA测序方法。 中华骨髓库重新启动以来,各实验室依据发展的需要,由于化学污染、检测通量小、检测分辨率低等原因,依次淘汰了PCR-SSP、PCR-SSO杂交条等检测方法。目前,普遍采用检测通量大、检测分辨率高的PCR-SSO荧光微珠流式法、SSO正向杂交基因芯法进行常规的批量检测。然而,由于技术瓶颈的存在,目前采用的常规检测方法的检测分辨率仍然是中低分辨水平,难以直接满足组织配型移植对高分辨水平的要求,而中低分辨配型两者相合的结果,经过高分辨率检测验证,约有40﹪难以达到移植标准要求,患者需要再次经历配型检索、分库采集捐献者血样、高分辨检测、主治大夫评估等一系列过程,该过程一般历时两周、耗费1万余元,许多时候由于病情紧迫,患者在等待的过程中永远失去了移植的机会。 近年来,随着经济和检测技术发展,作为HLA分型技术的金标准即DNA测序方法,已经成为欧美国家骨髓库的常规检测方法,直接提供满足组织移植配型要求的高分辨率检测结果,最大限度避免了按照中低分检测结果进行配型检索的盲目性,为患者赢得了宝贵的救治时间,减轻了经济负担,节约了医疗资源。 中华骨髓库已经把常规高分辨检测列入了重要发展日程,北京、深圳等数家实验室已经开展DNA测序探索工作,收到了良好的经济和社会效益。2007年,我实验室抓住“5451”人才培养工程的有利时机,派专业技术人员前往美国国家骨髓库系统学习DNA测序技术,掌握了直接测序法、单倍型测序法、组特异性测序法及克隆测序法共4种DNA测序方法,经测序确认了13个新的HLA等位基因,获得了WHO的HLA因子命名委员会的命名,填补了该项目省内空白。 在于与国内外有关实验室经过广泛研究合作的基础上,实验室购置了ABI3130XL测序仪,对中低分辩出现的疑难结果及与省内医疗机构开展的HLA与相关疾病的研究项目,采用DNA测序技术中的四种常规方法进行批量检测,完成了该技术在我实验室的建立,探索出了符合河南人群的DNA测序方法,并且中华骨髓库为开展常规测序检测、推动我省组织配型技术发展奠定了基础。 |