内氏放线菌是口腔常驻细菌，不仅可以引起动物疾病，在人类还是龋病的主要致病菌，并与牙周病的发病有一定的关系。以往研究发现内氏放线菌菌毛及细胞壁提取物能刺激机体免疫细胞（T、B淋巴细胞）产生一些细胞因子，所产生的细胞因子主要为炎症前期因子，IL-1β、IL-6、TNFα等，这些细胞因子进一步引起炎症反应导致牙髓炎、牙周炎的发生，但菌体表面成分复杂，那些成分能刺激那些细胞能产生那些细胞因子还不十分清楚。 本研究着重研究内氏放线菌菌体表面不同成份诱导人及动物成纤维细胞观察IL-1β、IL-6、TNFα的量。方法：将内氏放线菌标准菌株ATCC19246培养48小时后冻干，用酚与蒸馏水的混合物进行萃取，经过Sepharose6B提纯后，用氯仿－甲醇混合液去除部分多糖及核酸，并用DEAE（diethylaminoethyl，二乙氨乙基）纤维素层析进一步纯化，透析后，冻干，取胞壁提取物用PBS配制3种浓度（分别为1、10、100mg/mL）提取物分别刺激人成纤维细胞THP-1细胞株，用ELISA方法测定细胞培养上清中的IL-1β、IL-6、TNFα，0.1mg/mL大肠杆菌055:B5菌株LPS（ lipopolysaccharide，脂多糖）作为阳性对照。用搅拌法提取内氏放线菌19246菌毛，电镜鉴定菌毛的纯度。将提取的菌毛诱导小鼠成纤维细胞L929，48h后收集细胞培养上清，用Western-blotting分别检测细胞培养上清中IL-1β， IL-6，TNF-α。结果：THP-1细胞株可以产生一定量的IL-1β、IL-6、TNFα，以浓度为10mg/mL时诱导产生的量最高。电镜负染观察显示内氏放线菌菌毛与菌体充分分离，得到菌毛粗提物。Western-blotting结果显示菌毛处理过的细胞培养基中可检测到IL-1β、TNF-α、IL-6，而未经菌毛处理过的细胞培养基中未见IL-1β、TNF-α、IL-6分泌。结论：内氏放线菌细胞壁提取物及菌毛初提物可以诱导THP-1、L929细胞细胞株产生IL-1β、IL-6、TNFα，产生的量随着浓度变化存在差异。 牙周病是口腔常见病及多发病，而且随着年龄的增长发病率呈增加趋势，其结果导致患者牙龈红肿疼痛、牙龈萎缩、牙齿松动移位直至脱落，这直接影响人们的身体健康，也影响到人们的生存质量。因此牙周病病因的研究是许多口腔医务工作者重点研究的方向之一。病因学认为牙周可疑致病菌利用其菌体、脂多糖及菌毛等，刺激牙周组织产生炎症细胞因子，介导局部炎症反应，引起牙周组织细胞凋亡，诱导破骨细胞活化，加重炎症的发生。内氏放线菌是口腔内常驻革兰氏阳性分枝杆菌，有部分研究认为该菌与牙周炎症有一定的关系，但菌体表面那些成分能刺激那些细胞能产生那些细胞因子尚未见报道。本研究从基础实验方面对内氏放线菌诱导成纤维细胞是否能产生炎性细胞因子从分子水平进行了研究，得出了内氏放线菌细胞壁提取物及菌毛初提物可以诱导THP-1、L929成纤维细胞株产生IL-1β、IL-6、TNFα，而且产生的量随着浓度变化存在差异，而这些炎症因子很可能造成牙周组织的炎症及破坏，这很可能是内氏放线菌引起牙周炎症的原因。 本项研究成果为研究内氏放线菌与牙周病的关系提供了实验依据，为牙周病的病因学研究提供了可靠数据，并为临床更好地治疗牙周病奠定了基础。通过科研鉴定后，目前的研究结论对于临床医院治疗牙周病提供新的治疗依据，可以更好地促进牙周病患者的恢复，具有较好的社会效益和经济效益。 该项目通过鉴定后，将通过各种健康教育及专业继续教育等形式，介绍宣传该研究成果，早日在临床上得以应用。

内氏放线菌是口腔常驻细菌，不仅可以引起动物疾病，在人类还是龋病的主要致病菌，并与牙周病的发病有一定的关系。以往研究发现内氏放线菌菌毛及细胞壁提取物能刺激机体免疫细胞（T、B淋巴细胞）产生一些细胞因子，所产生的细胞因子主要为炎症前期因子，IL-1β、IL-6、TNFα等，这些细胞因子进一步引起炎症反应导致牙髓炎、牙周炎的发生，但菌体表面成分复杂，那些成分能刺激那些细胞能产生那些细胞因子还不十分清楚。 本研究着重研究内氏放线菌菌体表面不同成份诱导人及动物成纤维细胞观察IL-1β、IL-6、TNFα的量。方法：将内氏放线菌标准菌株ATCC19246培养48小时后冻干，用酚与蒸馏水的混合物进行萃取，经过Sepharose6B提纯后，用氯仿－甲醇混合液去除部分多糖及核酸，并用DEAE（diethylaminoethyl，二乙氨乙基）纤维素层析进一步纯化，透析后，冻干，取胞壁提取物用PBS配制3种浓度（分别为1、10、100mg/mL）提取物分别刺激人成纤维细胞THP-1细胞株，用ELISA方法测定细胞培养上清中的IL-1β、IL-6、TNFα，0.1mg/mL大肠杆菌055:B5菌株LPS（ lipopolysaccharide，脂多糖）作为阳性对照。用搅拌法提取内氏放线菌19246菌毛，电镜鉴定菌毛的纯度。将提取的菌毛诱导小鼠成纤维细胞L929，48h后收集细胞培养上清，用Western-blotting分别检测细胞培养上清中IL-1β， IL-6，TNF-α。结果：THP-1细胞株可以产生一定量的IL-1β、IL-6、TNFα，以浓度为10mg/mL时诱导产生的量最高。电镜负染观察显示内氏放线菌菌毛与菌体充分分离，得到菌毛粗提物。Western-blotting结果显示菌毛处理过的细胞培养基中可检测到IL-1β、TNF-α、IL-6，而未经菌毛处理过的细胞培养基中未见IL-1β、TNF-α、IL-6分泌。结论：内氏放线菌细胞壁提取物及菌毛初提物可以诱导THP-1、L929细胞细胞株产生IL-1β、IL-6、TNFα，产生的量随着浓度变化存在差异。 牙周病是口腔常见病及多发病，而且随着年龄的增长发病率呈增加趋势，其结果导致患者牙龈红肿疼痛、牙龈萎缩、牙齿松动移位直至脱落，这直接影响人们的身体健康，也影响到人们的生存质量。因此牙周病病因的研究是许多口腔医务工作者重点研究的方向之一。病因学认为牙周可疑致病菌利用其菌体、脂多糖及菌毛等，刺激牙周组织产生炎症细胞因子，介导局部炎症反应，引起牙周组织细胞凋亡，诱导破骨细胞活化，加重炎症的发生。内氏放线菌是口腔内常驻革兰氏阳性分枝杆菌，有部分研究认为该菌与牙周炎症有一定的关系，但菌体表面那些成分能刺激那些细胞能产生那些细胞因子尚未见报道。本研究从基础实验方面对内氏放线菌诱导成纤维细胞是否能产生炎性细胞因子从分子水平进行了研究，得出了内氏放线菌细胞壁提取物及菌毛初提物可以诱导THP-1、L929成纤维细胞株产生IL-1β、IL-6、TNFα，而且产生的量随着浓度变化存在差异，而这些炎症因子很可能造成牙周组织的炎症及破坏，这很可能是内氏放线菌引起牙周炎症的原因。 本项研究成果为研究内氏放线菌与牙周病的关系提供了实验依据，为牙周病的病因学研究提供了可靠数据，并为临床更好地治疗牙周病奠定了基础。通过科研鉴定后，目前的研究结论对于临床医院治疗牙周病提供新的治疗依据，可以更好地促进牙周病患者的恢复，具有较好的社会效益和经济效益。 该项目通过鉴定后，将通过各种健康教育及专业继续教育等形式，介绍宣传该研究成果，早日在临床上得以应用。