“人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化研究”是江西省卫生厅科教处科研项目，课题批准编号200308。申请时间为2003年12月。批准时间为2004年4月，批准经费3.0万元。研究正式开始于2004年6月，全部实验工作于2006年12月完成。 　　研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增以及培养中诱导其向神经细胞分化等方法，观察人骨髓间充质干细胞的生长、细胞表面标志以及定向分化为神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导成神经样细胞以利于治疗神经系统结构和功能性损伤的患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能。 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs经Trypanblue染色证明活细胞比率达到98%以上。 　　2、体外培养的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养的hMSCs生长特性和形态学结果：原代培养24h少许细胞贴壁呈圆形：3～4d可见细胞呈多角形、长棱形、纺锤形；继续培养细胞集落增多、融合成片，排列呈旋涡状，80%满瓶底则消化传代；苏木精-伊红染色细胞呈多角形、棱形。 　　3、流式细胞仪(FACS)检测证明第二代培养的hMSCs表面标志表达率：CD29(86.18±24.5%)，CD44(76.07±9.94%)，CDl66(61.12±10.76%)，CDl05(59.87±19.53%)，CD45(9.25±4.79%)，CD34(2.51±1.55%)，HLA-DR(4.31±3.77%)。 　　4、实验组培养的hMSCs加入EGF预诱导3d后再用p-ME预诱导1d细胞形态无明显变化，然后加入ATRA诱导2h后棱形细胞开始收缩，并逐渐形成突起，随着诱导培养时间的延长突起逐渐延长，终末端有类似神经细胞的终结及长轴突。诱导6h免疫细胞化学染色神经细胞NSE阳性率77%，神经细胞归巢蛋白(Nestin)阳性率50%，神经胶质细胞GFAP为阴性。对照组只加10%PBS，不加EGF和p-ME预诱导以及ATRA诱导，则细胞形态无明显变化，NSE、Nestin、GFAP均为阴性。 　　本研究经查新认为：“人骨髓间充质干细胞(hMSCs)经EGF和p-ME预处理，以及ATRA联合诱导分化成神经样细胞的研究方案除本项目之外未见有其它相同研究的报道”，该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国内先进水平。

　　“人骨髓间充质干细胞向神经细胞分化研究”是江西省卫生厅科教处科研项目，课题批准编号200308。申请时间为2003年12月。批准时间为2004年4月，批准经费3.0万元。研究正式开始于2004年6月，全部实验工作于2006年12月完成。 　　研究通过采用人骨髓间充质干细胞提取、体外培养、扩增以及培养中诱导其向神经细胞分化等方法，观察人骨髓间充质干细胞的生长、细胞表面标志以及定向分化为神经细胞的标志等生物学征象，证明人骨髓间充质干细胞在适当条件能够定向分化成神经细胞，从而为从人骨髓中获得间充质干细胞，并诱导成神经样细胞以利于治疗神经系统结构和功能性损伤的患者提供有价值的条件，其应用前景广泛，意义重大。目前对中枢神经系统的疾病和中枢神经系统损伤引起的神经系统功能障碍最佳的治疗方案是神经细胞移植以期恢复神经系统的正常功能。 　　1、分离的骨髓单个核细胞BMMNCs经Trypanblue染色证明活细胞比率达到98%以上。 　　2、体外培养的人骨髓间充质干细胞(hMSCs)、并传代扩增培养的hMSCs生长特性和形态学结果：原代培养24h少许细胞贴壁呈圆形：3～4d可见细胞呈多角形、长棱形、纺锤形；继续培养细胞集落增多、融合成片，排列呈旋涡状，80%满瓶底则消化传代；苏木精-伊红染色细胞呈多角形、棱形。 　　3、流式细胞仪(FACS)检测证明第二代培养的hMSCs表面标志表达率：CD29(86.18±24.5%)，CD44(76.07±9.94%)，CDl66(61.12±10.76%)，CDl05(59.87±19.53%)，CD45(9.25±4.79%)，CD34(2.51±1.55%)，HLA-DR(4.31±3.77%)。 　　4、实验组培养的hMSCs加入EGF预诱导3d后再用p-ME预诱导1d细胞形态无明显变化，然后加入ATRA诱导2h后棱形细胞开始收缩，并逐渐形成突起，随着诱导培养时间的延长突起逐渐延长，终末端有类似神经细胞的终结及长轴突。诱导6h免疫细胞化学染色神经细胞NSE阳性率77%，神经细胞归巢蛋白(Nestin)阳性率50%，神经胶质细胞GFAP为阴性。对照组只加10%PBS，不加EGF和p-ME预诱导以及ATRA诱导，则细胞形态无明显变化，NSE、Nestin、GFAP均为阴性。 　　本研究经查新认为：“人骨髓间充质干细胞(hMSCs)经EGF和p-ME预处理，以及ATRA联合诱导分化成神经样细胞的研究方案除本项目之外未见有其它相同研究的报道”，该项目研究达到了预期目标，研究水平达到了国内先进水平。