本研究分动物实验和细胞培养两部分。 动物实验部分：以Wistar大鼠腹腔注射STZ诱发糖尿病模型，分为对照组，糖尿病组和药物干预组。药物分别为：氯沙坦，苯那普利，氟伐他汀，葛根素等。分不同时间处死动物，进行以下观察： （1）常规石蜡包埋，HE染色及特殊染色，形态学观察及图像分析。 （2）Western Blot，免疫组化及流式细胞术检测BrdU掺入率、PCNA、CyclinE、CDK2、P27，MMP-2，MMP-3，MMP-10，TIMP-1，TIMP-2，TGF-β以及细胞外基质成分Ⅳ型胶原、LN和FN等的表达。 （3）采用基因芯片技术筛查糖尿病肾脏肥大期细胞周期相关基因表达谱的变化。 （4）采用Western blot和RT-PCR检测TGF-β及细胞外基质蛋和mRNA的表达。 （5）采用组化电镜技术观察肾小球基底膜负电荷位点的变化。同时，采用TIM 44基因转染糖尿病小鼠，观察TIM 44基因与肾脏细胞增殖、肥大、凋亡及其线粒体功能的检测。 细胞培养部分：原代培养大鼠肾小球系膜细胞，取传代细胞接种于96孔板，无血清培养基同步培养24h。观察不同时间（12、24、48、72h）高糖对细胞增殖状态的影响。免疫细胞化学检测PCNA、CyclinE、CDK2、P27等的表达。分别采用蛋白印迹（Western blot）检测肾小球CyclinE、CDK2、P27的表达；半定量RT-PCR检测P27，TGF-β1和FN mRNA的表达；ELISA检测上清TGF-β1和纤维连接蛋白。培养大鼠肾小管上皮细胞，给予高糖刺激，分别转染TIM44和pcDNA3.1空载体，观察细胞线粒体功能、超氧化状态及相关蛋白表达。 目前本项目内容已发表论文20余篇，并多次参加国际、国内学术会议交流。研究成果公开发表及进行学术会议交流后，我们提出的一些有关糖尿病肾病发生机制及药物作用机制引起了广大肾脏病学者及药学研究工作者的广泛关注，为进一步阐明DN发病机制提供了新的线索，为DN的防治药物选择提供了新的思路，我们将与分子生物学及药学工作者合作，开发新的糖尿病肾病治疗方法（基因治疗）和药物，为临床DN的防治提供切实可行的途径，必将带来良好的社会效益。

本研究分动物实验和细胞培养两部分。 动物实验部分：以Wistar大鼠腹腔注射STZ诱发糖尿病模型，分为对照组，糖尿病组和药物干预组。药物分别为：氯沙坦，苯那普利，氟伐他汀，葛根素等。分不同时间处死动物，进行以下观察： （1）常规石蜡包埋，HE染色及特殊染色，形态学观察及图像分析。 （2）Western Blot，免疫组化及流式细胞术检测BrdU掺入率、PCNA、CyclinE、CDK2、P27，MMP-2，MMP-3，MMP-10，TIMP-1，TIMP-2，TGF-β以及细胞外基质成分Ⅳ型胶原、LN和FN等的表达。 （3）采用基因芯片技术筛查糖尿病肾脏肥大期细胞周期相关基因表达谱的变化。 （4）采用Western blot和RT-PCR检测TGF-β及细胞外基质蛋和mRNA的表达。 （5）采用组化电镜技术观察肾小球基底膜负电荷位点的变化。同时，采用TIM 44基因转染糖尿病小鼠，观察TIM 44基因与肾脏细胞增殖、肥大、凋亡及其线粒体功能的检测。 细胞培养部分：原代培养大鼠肾小球系膜细胞，取传代细胞接种于96孔板，无血清培养基同步培养24h。观察不同时间（12、24、48、72h）高糖对细胞增殖状态的影响。免疫细胞化学检测PCNA、CyclinE、CDK2、P27等的表达。分别采用蛋白印迹（Western blot）检测肾小球CyclinE、CDK2、P27的表达；半定量RT-PCR检测P27，TGF-β1和FN mRNA的表达；ELISA检测上清TGF-β1和纤维连接蛋白。培养大鼠肾小管上皮细胞，给予高糖刺激，分别转染TIM44和pcDNA3.1空载体，观察细胞线粒体功能、超氧化状态及相关蛋白表达。 目前本项目内容已发表论文20余篇，并多次参加国际、国内学术会议交流。研究成果公开发表及进行学术会议交流后，我们提出的一些有关糖尿病肾病发生机制及药物作用机制引起了广大肾脏病学者及药学研究工作者的广泛关注，为进一步阐明DN发病机制提供了新的线索，为DN的防治药物选择提供了新的思路，我们将与分子生物学及药学工作者合作，开发新的糖尿病肾病治疗方法（基因治疗）和药物，为临床DN的防治提供切实可行的途径，必将带来良好的社会效益。