1、任务来源：2005年常州市科技局社会发展项目课题（项目编号：CS2005207）。 　　2、应用领域和技术原理 　　在非发酵菌中，铜绿假单胞菌是医院感染（如肺炎、败血症等）最重要的条件致病菌之一。由于广谱抗生素的广泛应用，出现了大量的多重耐药菌株，给临床治疗带来极大的困难。本项目应用琼脂稀释法等试验调查了本地区铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况；用分子生物学技术、生物信息技术、基因测序技术等系统研究了铜绿假单胞菌耐药机制及耐药基因，对指导临床合理使用抗生素、控制院内感染、研发新药的导向等具有重要意义。 　　3、性能指标 　　本项目检测和分析了铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况；研究多重耐药性铜绿假单胞菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类药物的耐药机制及基因突变规律；探讨铜绿假单胞菌对消毒剂苯扎溴铵的抗性与qacE△1-sul1基因的关系；并对铜绿假单胞菌菌株亲缘性进行分析。 　　4、与国内外同类技术比较 　　目前国外对细菌的耐药机制的研究已发展到分子水平，根据基因突变来分析细菌的耐药特点及耐药菌的流行病学规律，为指导临床合理用药提供重要依据。我国由于仪器设备等实验条件的限制，开展分子水平研究的并不多，与国外相比，存在着较大的差距。本项目使用的分子生物学等技术在国内处领先地位，部分达到国际先进水平。 　　5、成果的创造性、先进性 　　通过系统而深入研究，本项目创新点如下： 　　（1）铜绿假单胞菌携带的β-内酰胺酶基因以blaVEB (11.1%)、blaGES (11.1%)和blaCARB(48.1％)为主, oprD2基因缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因之一。 　　（2）氨基糖苷类修饰酶基因以aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ)、ant（2″）-Ⅰ为主，铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星抗生素高度耐药。 　　（3）铜绿假单胞菌对苯扎溴铵的抗性与qacE△1耐药基因密切相关。鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗性同样也与qacE△1耐药基因有关。 　　（4）多基因分型技术为控制铜绿假单胞菌院内感染提供快速、准确可靠手段。 　　（5）blaCARB序列与blaCARB-3（S46063）同源性为99%，在731位出现C→T替代，即204位亮氨酸被苯丙氨酸所取代（Leu204Phe），发现了一新的CARB亚型。 　　（6）研究发现了CARB一新的亚型：证实bla CARB序列与bla CARB-3（S46063）同源性为99%，在731位出现C→T替代，即204位亮氨酸被苯丙氨酸所取代（Leu204Phe）。 　　6、作用和意义 　　（1）通过对本地区铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况调查，可为临床合理使用抗生素，有效控制感染提供可靠依据。同时对推动分子微生物学理论发展及新药的研制和开发等具重要意义。 　　（2）通过研究细菌耐药机制，可以有效减缓耐药菌株的产生、播散，降低病人的治疗费用，具有显著的社会效益和经济效益。 　　7、推广应用范围、条件和前景及改进意见 　　本研究发表省级以上论文6篇，其中中华级论文2篇，省级核心期刊3篇。通过参加全国性学术活动，介绍研究成果；组织培训工作，推广相关技术。本项目适合在二级以上医院推广使用，到目前为止，该技术已被常州市第二人民医院、常州市第三人民医院及常州妇幼保健医院应用，取得了良好的效果，有较高的社会效益和经济效益，应用前景广阔。 　　目前对耐药基因的研究尚不够深入，下一步将积极创造条件用等电聚焦电泳、分子克隆等技术研究耐药基因（包括整合子、转座子）的转移和表达等。

　　1、任务来源：2005年常州市科技局社会发展项目课题（项目编号：CS2005207）。 　　2、应用领域和技术原理 　　在非发酵菌中，铜绿假单胞菌是医院感染（如肺炎、败血症等）最重要的条件致病菌之一。由于广谱抗生素的广泛应用，出现了大量的多重耐药菌株，给临床治疗带来极大的困难。本项目应用琼脂稀释法等试验调查了本地区铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况；用分子生物学技术、生物信息技术、基因测序技术等系统研究了铜绿假单胞菌耐药机制及耐药基因，对指导临床合理使用抗生素、控制院内感染、研发新药的导向等具有重要意义。 　　3、性能指标 　　本项目检测和分析了铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况；研究多重耐药性铜绿假单胞菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类药物的耐药机制及基因突变规律；探讨铜绿假单胞菌对消毒剂苯扎溴铵的抗性与qacE△1-sul1基因的关系；并对铜绿假单胞菌菌株亲缘性进行分析。 　　4、与国内外同类技术比较 　　目前国外对细菌的耐药机制的研究已发展到分子水平，根据基因突变来分析细菌的耐药特点及耐药菌的流行病学规律，为指导临床合理用药提供重要依据。我国由于仪器设备等实验条件的限制，开展分子水平研究的并不多，与国外相比，存在着较大的差距。本项目使用的分子生物学等技术在国内处领先地位，部分达到国际先进水平。 　　5、成果的创造性、先进性 　　通过系统而深入研究，本项目创新点如下： 　　（1）铜绿假单胞菌携带的β-内酰胺酶基因以blaVEB (11.1%)、blaGES (11.1%)和blaCARB(48.1％)为主, oprD2基因缺失是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因之一。 　　（2）氨基糖苷类修饰酶基因以aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ)、ant（2″）-Ⅰ为主，铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素和奈替米星抗生素高度耐药。 　　（3）铜绿假单胞菌对苯扎溴铵的抗性与qacE△1耐药基因密切相关。鲍曼不动杆菌对消毒剂的抗性同样也与qacE△1耐药基因有关。 　　（4）多基因分型技术为控制铜绿假单胞菌院内感染提供快速、准确可靠手段。 　　（5）blaCARB序列与blaCARB-3（S46063）同源性为99%，在731位出现C→T替代，即204位亮氨酸被苯丙氨酸所取代（Leu204Phe），发现了一新的CARB亚型。 　　（6）研究发现了CARB一新的亚型：证实bla CARB序列与bla CARB-3（S46063）同源性为99%，在731位出现C→T替代，即204位亮氨酸被苯丙氨酸所取代（Leu204Phe）。 　　6、作用和意义 　　（1）通过对本地区铜绿假单胞菌耐药特点及多重耐药菌株流行状况调查，可为临床合理使用抗生素，有效控制感染提供可靠依据。同时对推动分子微生物学理论发展及新药的研制和开发等具重要意义。 　　（2）通过研究细菌耐药机制，可以有效减缓耐药菌株的产生、播散，降低病人的治疗费用，具有显著的社会效益和经济效益。 　　7、推广应用范围、条件和前景及改进意见 　　本研究发表省级以上论文6篇，其中中华级论文2篇，省级核心期刊3篇。通过参加全国性学术活动，介绍研究成果；组织培训工作，推广相关技术。本项目适合在二级以上医院推广使用，到目前为止，该技术已被常州市第二人民医院、常州市第三人民医院及常州妇幼保健医院应用，取得了良好的效果，有较高的社会效益和经济效益，应用前景广阔。 　　目前对耐药基因的研究尚不够深入，下一步将积极创造条件用等电聚焦电泳、分子克隆等技术研究耐药基因（包括整合子、转座子）的转移和表达等。