一、任务来源：2006年常州市社会发展项目课题（项目编号：CS2006206）。 　　二、背景：特发性血小板减少性紫癜（ITP）属于自身免疫性疾病。近年来研究发现，细胞免疫在ITP免疫发病机制中的作用不容忽视，其中针对血小板膜糖蛋白抗原的特异性自身反应性T细胞的异常活化起着关键性作用，一旦这种自身反应性T细胞的免疫耐受机制被打破，可辅助同种自身抗原特异性B细胞产生自身抗体导致自身免疫病ITP的发生。而CD4+CD25+ 调节性T细胞（Treg）、树突状细胞（DC）及B细胞在维持机体自身免疫耐受中均发挥着及其重要的作用。本课题从临床和基础两方面研究CD4+CD25+ Treg细胞、DC及B细胞在ITP细胞免疫发病机制中的作用，为ITP的免疫治疗提供新的思路。研究内容如下： 　　三、 病例资料和方法 　　1、病例资料：常州市第一人民医院及苏州大学附属第一医院2005年10月至2007年4月收治的ITP患者共89例；其中初治慢性ITP患者26例。 　　2、方法：流式细胞术、实时荧光定量PCR、细胞免疫磁珠分选、细胞体外培养、混合淋巴细胞反应（MLR）、ELISA、3H-TdR细胞增殖测定。 　　四、结果 　　1、与正常对照组比较，ITP患者外周血中CD4+ FOXP3+ T细胞和CD4+CD25+ FOXP3+ T细胞数量减少；FOXP3 基因mRNA表达水平降低，CD4+CD25high T细胞免疫抑制活性减弱。 　　2、与正常对照组比较，慢性ITP患者不仅FOXP3基因在蛋白和mRNA水平均低表达，同时还伴有细胞因子TGF-β1基因在蛋白和mRNA水平的低表达，而细胞因子IL-10基因的表达无异常。大剂量地塞米松（HD-DXM）冲击的有效治疗明显促进了患者FOXP3及TGF-β1基因的表达。 　　3、与正常对照组比较，慢性ITP患者外周血循环中浆细胞来源的树突状细胞（pDC）和骨髓来源的树突状细胞（mDC）的绝对数量均没有明显差异；但外周血循环中总DC表面协同刺激分子CD86表达强度明显增强。HD-DXM的有效治疗明显减少了pDC数量；在增加了mDC数量同时，其细胞表面CD11c表达强度明显减弱。体外培养体系中，患者外周血单核细胞来源的DC对自体或异体血小板抗原的递呈功能明显增强，效应性T细胞增殖明显。 　　4、与正常对照组比较，ITP患者外周血CD19+ B细胞表面协同刺激分子CD86表达的阳性率明显增高，而CD40、CD80的表达无差异。糖皮质激素能有效降低CD80和CD86的表达水平。 　　五、成果主要特点和创新点 　　近年来，有关ITP细胞免疫机制异常方面的研究陆续见报道。但有关ITP患者在HD-DXM治疗前后CD4+CD25+ Treg细胞、外周血循环中DC及B细胞的变化未见报道。本研究主要特点和创新点如下： 　　1、ITP细胞免疫发病机制中存在CD4+CD25+ 调节性T细胞的免疫功能缺陷。 　　2、抗炎细胞因子TGF-β1参与了ITP的免疫发病机制，糖皮质激素可通过促进CD4+CD25+ Treg及TGF-β1的表达，发挥免疫抑制效应。 　　3、外周血循环中DC参与了 ITP的细胞免疫发病机制，糖皮质激素可通过减少外周血循环中pDC的数量, 抑制mDC的成熟发挥免疫抑制效应。 　　4、B细胞参与了ITP免疫发病机制，糖皮质激素可通过有效降低外周血B细胞表面CD80和CD86的表达水平而发挥免疫抑制效应。 　　六、成果意义、预期效应及推广情况 　　本研究成果中应用大剂量地塞米松冲击治疗慢性ITP患者，取得良好的临床疗效，已在常州市第二人民医院和武进人民医院得到推广应用。研究结果同时提示可通过扩增、输注CD4+CD25+ Treg细胞，诱导耐受性DC达到诱导免疫耐受，治疗ITP的目的。

　　一、任务来源：2006年常州市社会发展项目课题（项目编号：CS2006206）。 　　二、背景：特发性血小板减少性紫癜（ITP）属于自身免疫性疾病。近年来研究发现，细胞免疫在ITP免疫发病机制中的作用不容忽视，其中针对血小板膜糖蛋白抗原的特异性自身反应性T细胞的异常活化起着关键性作用，一旦这种自身反应性T细胞的免疫耐受机制被打破，可辅助同种自身抗原特异性B细胞产生自身抗体导致自身免疫病ITP的发生。而CD4+CD25+ 调节性T细胞（Treg）、树突状细胞（DC）及B细胞在维持机体自身免疫耐受中均发挥着及其重要的作用。本课题从临床和基础两方面研究CD4+CD25+ Treg细胞、DC及B细胞在ITP细胞免疫发病机制中的作用，为ITP的免疫治疗提供新的思路。研究内容如下： 　　三、 病例资料和方法 　　1、病例资料：常州市第一人民医院及苏州大学附属第一医院2005年10月至2007年4月收治的ITP患者共89例；其中初治慢性ITP患者26例。 　　2、方法：流式细胞术、实时荧光定量PCR、细胞免疫磁珠分选、细胞体外培养、混合淋巴细胞反应（MLR）、ELISA、3H-TdR细胞增殖测定。 　　四、结果 　　1、与正常对照组比较，ITP患者外周血中CD4+ FOXP3+ T细胞和CD4+CD25+ FOXP3+ T细胞数量减少；FOXP3 基因mRNA表达水平降低，CD4+CD25high T细胞免疫抑制活性减弱。 　　2、与正常对照组比较，慢性ITP患者不仅FOXP3基因在蛋白和mRNA水平均低表达，同时还伴有细胞因子TGF-β1基因在蛋白和mRNA水平的低表达，而细胞因子IL-10基因的表达无异常。大剂量地塞米松（HD-DXM）冲击的有效治疗明显促进了患者FOXP3及TGF-β1基因的表达。 　　3、与正常对照组比较，慢性ITP患者外周血循环中浆细胞来源的树突状细胞（pDC）和骨髓来源的树突状细胞（mDC）的绝对数量均没有明显差异；但外周血循环中总DC表面协同刺激分子CD86表达强度明显增强。HD-DXM的有效治疗明显减少了pDC数量；在增加了mDC数量同时，其细胞表面CD11c表达强度明显减弱。体外培养体系中，患者外周血单核细胞来源的DC对自体或异体血小板抗原的递呈功能明显增强，效应性T细胞增殖明显。 　　4、与正常对照组比较，ITP患者外周血CD19+ B细胞表面协同刺激分子CD86表达的阳性率明显增高，而CD40、CD80的表达无差异。糖皮质激素能有效降低CD80和CD86的表达水平。 　　五、成果主要特点和创新点 　　近年来，有关ITP细胞免疫机制异常方面的研究陆续见报道。但有关ITP患者在HD-DXM治疗前后CD4+CD25+ Treg细胞、外周血循环中DC及B细胞的变化未见报道。本研究主要特点和创新点如下： 　　1、ITP细胞免疫发病机制中存在CD4+CD25+ 调节性T细胞的免疫功能缺陷。 　　2、抗炎细胞因子TGF-β1参与了ITP的免疫发病机制，糖皮质激素可通过促进CD4+CD25+ Treg及TGF-β1的表达，发挥免疫抑制效应。 　　3、外周血循环中DC参与了 ITP的细胞免疫发病机制，糖皮质激素可通过减少外周血循环中pDC的数量, 抑制mDC的成熟发挥免疫抑制效应。 　　4、B细胞参与了ITP免疫发病机制，糖皮质激素可通过有效降低外周血B细胞表面CD80和CD86的表达水平而发挥免疫抑制效应。 　　六、成果意义、预期效应及推广情况 　　本研究成果中应用大剂量地塞米松冲击治疗慢性ITP患者，取得良好的临床疗效，已在常州市第二人民医院和武进人民医院得到推广应用。研究结果同时提示可通过扩增、输注CD4+CD25+ Treg细胞，诱导耐受性DC达到诱导免疫耐受，治疗ITP的目的。