本课题来源于北京市自然科学基金，北京市卫生局基金。 研究背景 由于艾滋病的流行和耐多药结核病的出现，使得结核病的控制更是雪上加霜。结核杆菌可侵及全身各器官，肺结核最多见。骨关节结核属肺外结核最为常见的一种，发病率高。在我国骨关节结核约占结核病总数的3-7％。结核杆菌的检出是结核病诊断的确切依据，而临床分离菌株的药敏试验又是指导结核病正确治疗的依据。但目前常规方法培养结核杆菌阳性率不高（肺结核为30%-40%，肺外结核为18%-20%），给结核病的诊断、治疗造成一定的困难，如何提高临床标本结核杆菌培养阳性率，缩短培养时间是提高结核病诊疗和控制水平的关键。 结核分枝杆菌耐药性和持留性(Persistence)是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题，结核菌的持留现象使得结核病病程延绵和复发，甚至时隔十几年又复燃，给结核病的治愈和控制带来很大的困扰。目前我们对结核持留菌在体内的复燃机制，以及复苏信号如何表达、调控，仍然知之甚少，一般认为机体免疫在阻止持留菌增殖中起作重要作用，但除机体免疫之外，在体内控制持留菌复苏和生长的因素还有很多，如细胞因子、细菌蛋白、蛋白酶等，对这些因子作用的进一步阐明，有助于了解机体内持留菌复苏的机制，从而为阻断因体内持留菌复燃而导致的结核病提供一条线索。 研究目的与意义 目的：证实复苏因子对临床标本体外结核分枝杆菌培养的复苏促进作用，摸索临床标本复苏培养最佳方案；寻找休眠结核分枝杆菌复苏关键基因。 意义：本课题应用肺外结核临床标本的结核杆菌复苏培养中，摸索结核杆菌复苏培养的最佳方案，有效的提高结核菌培养阳性率，缩短培养时间，为结核病的诊断、鉴别诊断、治疗提供帮助。采用抑制性消减杂交（SSH）等技术，寻找休眠菌复苏的关键基因，把这些基因作为阻断休眠菌复苏的分子靶位，为慢性迁延性结核病的治疗和控制结核病复发提供新的思路。 技术原理及性能指标 1.通过临床标本结核杆菌复苏培养和不含复苏因子的7H9培养，定期检测培养液浊度（OD值），以证实复苏因子的复苏作用的存在。 2.用不同浓度、不同种类的复苏因子组合应用在临床标本的复苏培养中，定期检测培养液浊度（OD值），摸索出结核杆菌复苏培养的最佳方案。 3.通过SSH技术，筛选与休眠菌解休眠有关的结核杆菌基因，获得休眠菌和复苏结核杆菌基因表达上有差异的克隆。 4.对筛选出的候选基因进行克隆、提取质粒DNA、测序、开放阅读框架（ORF）确定，找到对应基因，以获得休眠菌解休眠的关键基因。为基因功能研究提供依据，并用实时荧光定量PCR验证。 技术的创造性与先进性： 复苏因子促进人工诱导的休眠菌复苏的作用已得到肯定。本课题以此为依据率先应用到肺外结核临床标本的结核杆菌复苏培养中，摸索结核杆菌复苏培养的最佳方案，有效的提高结核菌培养阳性率，缩短培养时间，为结核病的诊断、鉴别诊断、治疗提供帮助。 采用SSH等技术，寻找休眠菌复苏的关键基因，把这些基因作为阻断休眠菌复苏的分子靶位，不失为慢性迁延性结核病治疗和控制结核病复发的新的思路。 社会经济效益 此技术的推广，能提高结核病实验室诊断的阳性率，缩短实验时间，降低结核病人的治疗成本，提高病床周转率。复苏关健基因发现的社会效益和经济效益是一个远期效果，可能会为慢性迁延性结核病治疗和控制结核病复发提供帮助。 本课题所运用的细菌培养方法和抑制性消减杂交及实时荧光定量PCR技术目前尚属先进成熟，在同等技术中还为先进。 此成果应用在结核杆菌细菌学培养方面和对药物靶位筛选的研究方面 获奖情况 结核分枝杆菌耐药分子机制及基因快速检测的研究 荣获2001年北京市科技进步三等奖 （2001 医－3-024-01）

本课题来源于北京市自然科学基金，北京市卫生局基金。 研究背景 由于艾滋病的流行和耐多药结核病的出现，使得结核病的控制更是雪上加霜。结核杆菌可侵及全身各器官，肺结核最多见。骨关节结核属肺外结核最为常见的一种，发病率高。在我国骨关节结核约占结核病总数的3-7％。结核杆菌的检出是结核病诊断的确切依据，而临床分离菌株的药敏试验又是指导结核病正确治疗的依据。但目前常规方法培养结核杆菌阳性率不高（肺结核为30%-40%，肺外结核为18%-20%），给结核病的诊断、治疗造成一定的困难，如何提高临床标本结核杆菌培养阳性率，缩短培养时间是提高结核病诊疗和控制水平的关键。 结核分枝杆菌耐药性和持留性(Persistence)是关系结核病临床疗效和结核病流行控制的两大课题，结核菌的持留现象使得结核病病程延绵和复发，甚至时隔十几年又复燃，给结核病的治愈和控制带来很大的困扰。目前我们对结核持留菌在体内的复燃机制，以及复苏信号如何表达、调控，仍然知之甚少，一般认为机体免疫在阻止持留菌增殖中起作重要作用，但除机体免疫之外，在体内控制持留菌复苏和生长的因素还有很多，如细胞因子、细菌蛋白、蛋白酶等，对这些因子作用的进一步阐明，有助于了解机体内持留菌复苏的机制，从而为阻断因体内持留菌复燃而导致的结核病提供一条线索。 研究目的与意义 目的：证实复苏因子对临床标本体外结核分枝杆菌培养的复苏促进作用，摸索临床标本复苏培养最佳方案；寻找休眠结核分枝杆菌复苏关键基因。 意义：本课题应用肺外结核临床标本的结核杆菌复苏培养中，摸索结核杆菌复苏培养的最佳方案，有效的提高结核菌培养阳性率，缩短培养时间，为结核病的诊断、鉴别诊断、治疗提供帮助。采用抑制性消减杂交（SSH）等技术，寻找休眠菌复苏的关键基因，把这些基因作为阻断休眠菌复苏的分子靶位，为慢性迁延性结核病的治疗和控制结核病复发提供新的思路。 技术原理及性能指标 1.通过临床标本结核杆菌复苏培养和不含复苏因子的7H9培养，定期检测培养液浊度（OD值），以证实复苏因子的复苏作用的存在。 2.用不同浓度、不同种类的复苏因子组合应用在临床标本的复苏培养中，定期检测培养液浊度（OD值），摸索出结核杆菌复苏培养的最佳方案。 3.通过SSH技术，筛选与休眠菌解休眠有关的结核杆菌基因，获得休眠菌和复苏结核杆菌基因表达上有差异的克隆。 4.对筛选出的候选基因进行克隆、提取质粒DNA、测序、开放阅读框架（ORF）确定，找到对应基因，以获得休眠菌解休眠的关键基因。为基因功能研究提供依据，并用实时荧光定量PCR验证。 技术的创造性与先进性： 复苏因子促进人工诱导的休眠菌复苏的作用已得到肯定。本课题以此为依据率先应用到肺外结核临床标本的结核杆菌复苏培养中，摸索结核杆菌复苏培养的最佳方案，有效的提高结核菌培养阳性率，缩短培养时间，为结核病的诊断、鉴别诊断、治疗提供帮助。 采用SSH等技术，寻找休眠菌复苏的关键基因，把这些基因作为阻断休眠菌复苏的分子靶位，不失为慢性迁延性结核病治疗和控制结核病复发的新的思路。 社会经济效益 此技术的推广，能提高结核病实验室诊断的阳性率，缩短实验时间，降低结核病人的治疗成本，提高病床周转率。复苏关健基因发现的社会效益和经济效益是一个远期效果，可能会为慢性迁延性结核病治疗和控制结核病复发提供帮助。 本课题所运用的细菌培养方法和抑制性消减杂交及实时荧光定量PCR技术目前尚属先进成熟，在同等技术中还为先进。 此成果应用在结核杆菌细菌学培养方面和对药物靶位筛选的研究方面 获奖情况 结核分枝杆菌耐药分子机制及基因快速检测的研究 荣获2001年北京市科技进步三等奖 （2001 医－3-024-01）