由创伤、肿瘤切除等造成的软组织缺损的修复和功能重建在临床很常见，但尚无有效治疗办法。组织工程为解决此难题提供了新的思路和途径。脂肪组织工程可望成为软组织缺损修复的直接替代途径。而种子细胞是组织工程研究的核心课题，通过本课题研究，从现有两种可成脂和增殖的脂肪前体细胞中为脂肪组织工程筛选出成脂活性及增殖能力较好的种子细胞，为脂肪组织工程及临床最终通过脂肪组织工程方法修复软组织缺损奠定了基础。 　　本课题选择成人(18～40ys)志愿者，取皮下脂肪及髂嵴骨髓组织，体外培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs)和皮下脂肪来源前脂肪细胞(preadipocyte，Pra)； 结合成骨诱导分化及免疫荧光流式细胞术(CD44、CD34抗体)，对人MSCs进行鉴定。通过诱导成脂分化及S-100、脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein，aP2)的免疫细胞化学方法鉴定人Pra。体外诱导人MSCs成脂分化，观察分化过程形态学变化，有、无血清及细胞融合程度对成脂分化的影响。从形态学变化方面初步判定人MSCs诱导进入前脂肪细胞的分化阶段(DBM)及分化时间。再通过aP2的免疫细胞化学方法及A_2COL_6基因的RT-PCR半定量方法进一步鉴定DBM。通过MTT法、DBM及Pra增殖能力。筛选适合于脂肪组织工程的MSCs诱导成脂条件；观察和分析人MSCs成脂诱导分化过程；识别、鉴定由人MSCs诱导的前脂肪细胞(differentiated bone marrow mesenchymal stem cells，DBM)；比较人Pra与DBM的增殖及成脂分化能力，从中为脂肪组织工程筛选出比较理想的种子细胞。并进一步分析筛选出的种子细胞在体外扩增阶段，不同代次细胞的老化程度，为脂肪组织工程选择合适代次的种子细胞提供部分实验依据。 　　本课题的主要结果和结论： (1) Pra增殖能力强于MSCs及DBM；DBM表现出一定程度的负增殖。 (2) Pra与DBM及MSCs成脂分化潜能接近。 (3) 在体外，MSCs成脂定向分化是可以控制的，但成脂定向控制造成增殖能力的丧失。 (4) 综合增殖、成脂分化潜能，Pra仍然是目前比较适合的脂肪组织工程的种子细胞。 (5) 应选择10～15代以内的Pra作为脂肪组织工程种子细胞。

　　由创伤、肿瘤切除等造成的软组织缺损的修复和功能重建在临床很常见，但尚无有效治疗办法。组织工程为解决此难题提供了新的思路和途径。脂肪组织工程可望成为软组织缺损修复的直接替代途径。而种子细胞是组织工程研究的核心课题，通过本课题研究，从现有两种可成脂和增殖的脂肪前体细胞中为脂肪组织工程筛选出成脂活性及增殖能力较好的种子细胞，为脂肪组织工程及临床最终通过脂肪组织工程方法修复软组织缺损奠定了基础。 　　本课题选择成人(18～40ys)志愿者，取皮下脂肪及髂嵴骨髓组织，体外培养人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，MSCs)和皮下脂肪来源前脂肪细胞(preadipocyte，Pra)； 结合成骨诱导分化及免疫荧光流式细胞术(CD44、CD34抗体)，对人MSCs进行鉴定。通过诱导成脂分化及S-100、脂肪酸结合蛋白(Fatty acid-binding protein，aP2)的免疫细胞化学方法鉴定人Pra。体外诱导人MSCs成脂分化，观察分化过程形态学变化，有、无血清及细胞融合程度对成脂分化的影响。从形态学变化方面初步判定人MSCs诱导进入前脂肪细胞的分化阶段(DBM)及分化时间。再通过aP2的免疫细胞化学方法及A_2COL_6基因的RT-PCR半定量方法进一步鉴定DBM。通过MTT法、DBM及Pra增殖能力。筛选适合于脂肪组织工程的MSCs诱导成脂条件；观察和分析人MSCs成脂诱导分化过程；识别、鉴定由人MSCs诱导的前脂肪细胞(differentiated bone marrow mesenchymal stem cells，DBM)；比较人Pra与DBM的增殖及成脂分化能力，从中为脂肪组织工程筛选出比较理想的种子细胞。并进一步分析筛选出的种子细胞在体外扩增阶段，不同代次细胞的老化程度，为脂肪组织工程选择合适代次的种子细胞提供部分实验依据。 　　本课题的主要结果和结论： (1) Pra增殖能力强于MSCs及DBM；DBM表现出一定程度的负增殖。 (2) Pra与DBM及MSCs成脂分化潜能接近。 (3) 在体外，MSCs成脂定向分化是可以控制的，但成脂定向控制造成增殖能力的丧失。 (4) 综合增殖、成脂分化潜能，Pra仍然是目前比较适合的脂肪组织工程的种子细胞。 (5) 应选择10～15代以内的Pra作为脂肪组织工程种子细胞。