该课题为自选课题。 本研究通过对革兰阴性杆菌连续五年耐药性趋势及其ESBLs基因分型的研究，了解了革兰阴性杆菌的耐药谱，产ESBLs的细菌种类分布，明确了ESBLs基因类型的分子流行病学特征，为临床产ESBLs菌株感染的预防和治疗提供可靠依据，为本地区后续耐药性监测、临床抗感染治疗、疫苗研制和新型抗感染药物开发提供良好的分子基础。 研究中： 1、利用微生物专业软件“whonet5.3”对兰州大学第二医院2000年～2004年临床分离革兰阴性杆菌药敏结果进行录入及耐药性分析，总结耐药趋势。 2、对临床分离所有疑似产ESBLs的革兰阴性杆菌通过表型初筛法（K-B法）、表型确认法(K-B法)、改良三维试验确认其产ESBLs 表型，同时比较表型确认法(K-B法)、改良三维试验在检测产ESBLs的各种革兰阴性杆菌的准确率，明确产ESBLs菌株种类、科室分布、各种革兰阴性杆菌产ESBLs分离率。 3、对表型确认产ESBLs49株菌进行ESBLs基因型酶（TEM，SHV，CTX-M-1型）的引物设计、质粒提取、确定反应体系及反应参数、PCR扩增；PCR扩增产物测序；PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳并摄像。通过研究得出的主要结论： ①本院临床分离革兰阴性杆菌最常见为大肠埃希菌，阴沟肠杆菌分离率呈上升趋势；革兰阴性杆菌对临床常用抗生素均有较高的耐药率，耐药性逐年上升；派拉西林/他唑巴坦、亚胺培南是耐药性较低的抗生素。 ②产ESBLs菌阳性率28%，阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌是主要产ESBLs的革兰阴性杆菌；神经科是主要产ESBLs菌的病区。 ③所有对两种以上三代头孢菌素耐药的革兰阴性杆菌应检测ESBLs；阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等菌中ESBLs测定应采用改良三维试验。 4、ESBLs基因以TEM型、CTX-M型为主，携带双基因（主要是TEM+CTX-M型）的菌株在我院有流行。 了解革兰阴性杆菌连续五年的耐药谱及趋势变化，可为临床抗感染治疗的经验用药，提供科学的依据，从而减少抗生素不合理使用带来的社会危害，减少患者的经济负担。 了解产ESBLs的细菌种类分布及分离率，明确ESBLs基因类型的分子流行病学特征，为临床产ESBLs菌株感染的预防和治疗提供可靠依据，为本地区后续耐药性监测、临床抗感染治疗、疫苗研制和新型抗感染药物开发提供良好的分子基础。 为推广该项科研成果，首先在省内开展学术交流，建立相关技术平台，吸纳其它医院，以扩大下一步研究范围。

该课题为自选课题。 本研究通过对革兰阴性杆菌连续五年耐药性趋势及其ESBLs基因分型的研究，了解了革兰阴性杆菌的耐药谱，产ESBLs的细菌种类分布，明确了ESBLs基因类型的分子流行病学特征，为临床产ESBLs菌株感染的预防和治疗提供可靠依据，为本地区后续耐药性监测、临床抗感染治疗、疫苗研制和新型抗感染药物开发提供良好的分子基础。 研究中： 1、利用微生物专业软件“whonet5.3”对兰州大学第二医院2000年～2004年临床分离革兰阴性杆菌药敏结果进行录入及耐药性分析，总结耐药趋势。 2、对临床分离所有疑似产ESBLs的革兰阴性杆菌通过表型初筛法（K-B法）、表型确认法(K-B法)、改良三维试验确认其产ESBLs 表型，同时比较表型确认法(K-B法)、改良三维试验在检测产ESBLs的各种革兰阴性杆菌的准确率，明确产ESBLs菌株种类、科室分布、各种革兰阴性杆菌产ESBLs分离率。 3、对表型确认产ESBLs49株菌进行ESBLs基因型酶（TEM，SHV，CTX-M-1型）的引物设计、质粒提取、确定反应体系及反应参数、PCR扩增；PCR扩增产物测序；PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳并摄像。通过研究得出的主要结论： ①本院临床分离革兰阴性杆菌最常见为大肠埃希菌，阴沟肠杆菌分离率呈上升趋势；革兰阴性杆菌对临床常用抗生素均有较高的耐药率，耐药性逐年上升；派拉西林/他唑巴坦、亚胺培南是耐药性较低的抗生素。 ②产ESBLs菌阳性率28%，阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌是主要产ESBLs的革兰阴性杆菌；神经科是主要产ESBLs菌的病区。 ③所有对两种以上三代头孢菌素耐药的革兰阴性杆菌应检测ESBLs；阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌等菌中ESBLs测定应采用改良三维试验。 4、ESBLs基因以TEM型、CTX-M型为主，携带双基因（主要是TEM+CTX-M型）的菌株在我院有流行。 了解革兰阴性杆菌连续五年的耐药谱及趋势变化，可为临床抗感染治疗的经验用药，提供科学的依据，从而减少抗生素不合理使用带来的社会危害，减少患者的经济负担。 了解产ESBLs的细菌种类分布及分离率，明确ESBLs基因类型的分子流行病学特征，为临床产ESBLs菌株感染的预防和治疗提供可靠依据，为本地区后续耐药性监测、临床抗感染治疗、疫苗研制和新型抗感染药物开发提供良好的分子基础。 为推广该项科研成果，首先在省内开展学术交流，建立相关技术平台，吸纳其它医院，以扩大下一步研究范围。