技术说明
1、采样：分别到广西环江毛南族、融水苗族、罗城仫佬族和金秀瑶族自治县随机选取三代以上均为毛南族、苗族、仫佬族和瑶族的无关个体各200名（男性、女性各100名）。各采集静脉血样约2ml，枸橼酸钠抗凝，分装于5ml的试管中，-20℃保存备用。
2、DNA提取：采用Chelex-100法提取或经典的酚—氯仿提取法进行。
3、PCR扩增：
（1）反应体系：PCR反应在10ul的体系中进行。采用美国ABI公司的AmpF STR IdentifilerTM PCR Amplification kit试剂盒，按试剂盒上的说明书，以0.2ml的薄壁PCR管作为反应管，每管加入buffer4.4ul,H_2O 3.3ul,PrimerSet 2.2ul,TaqGoldDNA聚合酶0.2ul,模板DNA1ul。混匀后置于ABI9700扩增仪进行扩增。
（2）反应条件：95℃条件下变性11min；然后94℃条件下1min，59℃条件下1min，72℃条件下1min，10个循环；再在60℃条件下扩增60min，所得扩增产物于4℃条件下避光保存备用。
4、扩增产物的电泳分离及检测：
（1）电泳样品的制备：以0.5ml的薄壁EP管作为反应管，每管加入去离子甲酰胺（Hi-Di）12ul，分子量标记物（GS-500LIZ）0.3ul，PCR扩增产物1ul，混匀，于96℃变性3min后立即冰浴。
（2）加样及电泳分离和检测：取变性液10ul，加入样本板中，然后放在ABI3100遗传分析仪进行毛细管电泳，经Datacollection101收集信息后，用GeneScan Analysis3.7和Genotyper3.7分析软件进行等位基因分型。
5、结果处理：
（1）计算群体遗传学参数：根据每个STR基因座的基因型用直接记数法计算出各基因座的等位基因频率及基因型频率、杂合度、个体识别力、非父排除率、多态信息总量以及每个民族15个STR基因座的累积非父排除率和累积个体识别率等群体遗传学参数。
（2）Hardy-Weinberg平衡的验证：根据每个STR基因座的基因型用纯合度检验法检测样本的基因型的分布是否符合遗传平衡。
（3）进行群体遗传学研究：根据所得的各基因座的等位基因频率和已经报道国内群体数据计算群体间的遗传距离，并构建系统系统发生树，探讨各群体间的遗传关系。
应用前景：
1、本研究所报道的广西毛南族、苗族、仫佬族和瑶族四个少数民族的15个常染色体STR基因座(D2S1338、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、CSF1PO、TPOX、TH01、vWA、FGA)的等位基因频率、基因型及各遗传学参数可为法医学的个体识别和亲子鉴定时提供基础数据，具有十分现实的应用价值。目前，广西公安厅刑事科学技术中心用本项目所得的广西4个少数民族15个STR基因座的数据建立广西各民族15个STR数据库，而且这个数据库已被广西公安系统进行个体识别和亲子鉴定时用作个体识别似然比率和亲权概率计算的依据。
2、本研究首次从常染色体STR基因座的角度研究广西少数民族之间的遗传关系，丰富了广西少数民族群体遗传学研究的方法，也为群体遗传学研究群体间遗传关系，提供广西四个少数民族15个STR基因座的数据。随着PCR等生化实验技术的改进与越来越多新方法的出现，STR多态性研究将给民族起源、迁移、发展、民族渊源、民族地理、民族考古、特殊人群生理生化、遗传特性等研究带来更大的贡献。 |
