1.课题来源与背景 　　课题《人苍白杆菌分子生物学特性和免疫性研究》是2000年4月通过深圳市科技局立项（编号深卫科200004037）并于2004年完成各项研究任务。 　　2.技术原理及性能指标 　　鉴于国内外对于人苍白杆菌对人致病的主要致病因子及该菌抗原是否对布氏杆菌具有交叉免疫保护作用均不十分清楚，课题组研究了：①根据细菌基因文献资料自行设计了一对引物，对人苍白杆菌分离株、ATCC人苍白杆菌标准株及羊种布氏菌标准株进行PCR并对其进行核苷酸序列测定和比较；②用酚水法提取人苍白杆菌分离株脂多糖（LPS）作相关生物学活性试验（鲎试验、家兔致热试验、Shwartzman试验及小鼠毒性试验），观察其LPS的毒性作用；③用三氯醋酸法提取人苍白杆菌及羊布氏杆菌的外膜蛋白组分（OMP），并免疫动物，观察人苍白杆菌对羊布氏杆菌是否有交叉免疫保护作用。 　　该项目计划书上要求达到的主要性能指标基本完成：完善了人苍白杆菌的基因库资料，为今后设计该菌的特异性引物和基因探针在分子水平上检测该菌打下了基础；明确了人苍白杆菌虽然也存在脂多糖成分，也具有与大肠杆菌脂多糖相类似的生物学活性，但其毒性明显较大肠杆菌LPS为弱；明确了人苍白杆菌分离株在遗传学上与羊布氏杆菌具有非常密切的亲缘关系，但其外膜蛋白组分对羊布氏杆菌无交叉保护作用。 　　3.技术的创造性与先进性 　　(1)课题负责人在国内首家报道由人苍白杆菌引起的急性化脓性脑膜炎病例（中华医学检验杂志，1999，22:241）。 　　(2)完善了人苍白杆菌的基因库资料，为今后利用该菌的特异性引物和基因探针在分子水平上检测该菌打下了基础。 　　(3)明确了人苍白杆菌LPS是一种重要致病因子，但其毒性低于一般细菌内毒素，故病例罕见。此项研究填补了国内空白。 　　(4)本研究发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉免疫保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。 　　4.技术的成熟程度，适用范围和安全性 　　(1)通过设计人苍白杆菌的特异性引物和基因探针，可在分子水平上检测该菌，具有一定的经济效益。 　　(2)通过研究发现人苍白杆菌脂多糖（LPS）具有内毒素的活性，可能是一种重要的致病因子，但其毒性低于大肠埃希菌脂多糖。虽然病例罕见，但应引起临床高度重视。 　　(3)本研究发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉免疫保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。至于人苍白杆菌的其他组分是否有效，有待于进一步分析探讨，此与国外报道有差异。 　　5.应用情况及存在的问题 　　(1)国内首次报导自己设计人苍白杆菌的特异性引物，通过PCR检测该菌，速度快，准确性高，可生产诊断试剂盒创造一定的经济效益。 　　(2)明确了人苍白杆菌LPS是一种重要致病因子；发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。至于人苍白杆菌的其他组分是否有效，有待于进一步分析探讨。 　　(3)因为经费不足，没有对该菌的其它组分作进一步的研究。拟进一步完善该菌的生物学性状研究，以探讨并筛选出可用于预防或诊断布氏病的人苍白杆菌的有效、无害的抗原物质。

　　1.课题来源与背景 　　课题《人苍白杆菌分子生物学特性和免疫性研究》是2000年4月通过深圳市科技局立项（编号深卫科200004037）并于2004年完成各项研究任务。 　　2.技术原理及性能指标 　　鉴于国内外对于人苍白杆菌对人致病的主要致病因子及该菌抗原是否对布氏杆菌具有交叉免疫保护作用均不十分清楚，课题组研究了：①根据细菌基因文献资料自行设计了一对引物，对人苍白杆菌分离株、ATCC人苍白杆菌标准株及羊种布氏菌标准株进行PCR并对其进行核苷酸序列测定和比较；②用酚水法提取人苍白杆菌分离株脂多糖（LPS）作相关生物学活性试验（鲎试验、家兔致热试验、Shwartzman试验及小鼠毒性试验），观察其LPS的毒性作用；③用三氯醋酸法提取人苍白杆菌及羊布氏杆菌的外膜蛋白组分（OMP），并免疫动物，观察人苍白杆菌对羊布氏杆菌是否有交叉免疫保护作用。 　　该项目计划书上要求达到的主要性能指标基本完成：完善了人苍白杆菌的基因库资料，为今后设计该菌的特异性引物和基因探针在分子水平上检测该菌打下了基础；明确了人苍白杆菌虽然也存在脂多糖成分，也具有与大肠杆菌脂多糖相类似的生物学活性，但其毒性明显较大肠杆菌LPS为弱；明确了人苍白杆菌分离株在遗传学上与羊布氏杆菌具有非常密切的亲缘关系，但其外膜蛋白组分对羊布氏杆菌无交叉保护作用。 　　3.技术的创造性与先进性 　　(1)课题负责人在国内首家报道由人苍白杆菌引起的急性化脓性脑膜炎病例（中华医学检验杂志，1999，22:241）。 　　(2)完善了人苍白杆菌的基因库资料，为今后利用该菌的特异性引物和基因探针在分子水平上检测该菌打下了基础。 　　(3)明确了人苍白杆菌LPS是一种重要致病因子，但其毒性低于一般细菌内毒素，故病例罕见。此项研究填补了国内空白。 　　(4)本研究发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉免疫保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。 　　4.技术的成熟程度，适用范围和安全性 　　(1)通过设计人苍白杆菌的特异性引物和基因探针，可在分子水平上检测该菌，具有一定的经济效益。 　　(2)通过研究发现人苍白杆菌脂多糖（LPS）具有内毒素的活性，可能是一种重要的致病因子，但其毒性低于大肠埃希菌脂多糖。虽然病例罕见，但应引起临床高度重视。 　　(3)本研究发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉免疫保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。至于人苍白杆菌的其他组分是否有效，有待于进一步分析探讨，此与国外报道有差异。 　　5.应用情况及存在的问题 　　(1)国内首次报导自己设计人苍白杆菌的特异性引物，通过PCR检测该菌，速度快，准确性高，可生产诊断试剂盒创造一定的经济效益。 　　(2)明确了人苍白杆菌LPS是一种重要致病因子；发现人苍白杆菌OMP对羊布氏杆菌并没有交叉保护作用，不能用作预防布氏杆菌的候选疫苗抗原。至于人苍白杆菌的其他组分是否有效，有待于进一步分析探讨。 　　(3)因为经费不足，没有对该菌的其它组分作进一步的研究。拟进一步完善该菌的生物学性状研究，以探讨并筛选出可用于预防或诊断布氏病的人苍白杆菌的有效、无害的抗原物质。