项目编号：200622005 　　糖尿病是危害人类健康的常见病及多发病，且呈逐年上升趋势。糖尿病随病情发展，可造成多个器官细胞增殖与凋亡的平衡破坏，导致器官的损伤及功能障碍。口渴、多饮是糖尿病典型临床症状之一，对于糖尿病口渴发生机理的研究，以往多集中于渗透压及抗利尿激素调节中枢方面及糖尿病性微血管病变方面。近年的动物实验发现，糖尿病时颌下腺分泌功能的明显降低可能与糖尿病病人的口干、口渴有关。本实验采用db/db自发性糖尿病小鼠颌下腺模型是国际、国内公认的良好动物模型，它的临床表现及病理改变与人类Ⅱ型糖尿病极为相似。本实验应用光学显微镜、免疫组化及TUNEL原位标记的方法，对糖尿病时小鼠颌下腺形态学改变、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达及凋亡细胞阳性率的变化进行动态观察，以期对糖尿病时小鼠颌下腺形态学改变、细胞增殖、细胞凋亡的研究，说明糖尿病时小鼠颌下腺细胞生存状态，阐明其功能降低的原因，明确糖尿病小鼠颌下腺功能损害与PCNA表达及细胞凋亡的关系，为糖尿病的临床治疗及基础研究提供实验依据。 　　2005年4月，我们与承德医学院及承德市政府机关门诊部等多名同志组成科研小组进行资料查询，试验设计；于2005年6月开始进行课题的研究，课题组的同志们和相关技术人员通力合作，历时一年的时间完成该项课题。 　　对象：选取3，4，6，8，10月龄db/db型小鼠，即表型肥胖、血糖高于10mmol/L小鼠，作为糖尿病组。对照组选取相应月龄的同种db/+m小鼠。每组5只，总计50只。 　　原理：SP法免疫组化染色：免疫组化技术是利用免抗鼠的PCNA的特异性抗体和抗原特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂显示一定的颜色，借助荧光显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织结构。PCNA在对照组及糖尿病组颌下腺的导管及腺泡细胞中均有PCNA免疫反应阳性细胞存在，尤以颗粒曲管中表达最强，阳性反应物质主要位于导管及腺泡细胞的细胞核中。采用TUNEL原位标记技术观测到凋亡细胞在对照组及糖尿病组的导管细胞、腺泡细胞中均有分布，导管细胞中分布较多，阳性反应物质分布在导管细胞、腺泡细胞的细胞核中。 　　统计学方法：结果判定按照Jin等描述的方法，每张切片随机观察至少300个细胞，计算阳性率。数据处理采用析因实验设计的方差分析，因素间有交互作用时，采用Duncan多组极差检验分析主效应的作用。 　　结果：随着糖尿病的发展，颌下腺组织出现腺体萎缩及实质细胞形态学改变；PCNA在对照组及糖尿病组颌下腺中均有表达。同月龄比较，对照组与糖尿病组的细胞阳性率，糖尿病组表达均低于对照组；不同月龄比较，PCNA细胞阳性率，对照组随月龄增大、糖尿病组随着病程延长均呈减弱趋势。糖尿病组PCNA表达减弱速度明显快于对照组。差异有统计学意义（P<0.01）。凋亡细胞在对照组及糖尿病组的导管细胞、腺泡细胞中均有分布，同月龄比较，糖尿病组凋亡细胞的阳性率高于对照组；不同月龄比较，凋亡细胞阳性率，对照组随月龄增大、糖尿病组随着病程延长均呈增强趋势，糖尿病组凋亡细胞的阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。 　　创新点及技术关键：本课题将db/db自发性糖尿病小鼠动物模型用于颌下腺的研究；PCNA在db/db自发性糖尿病组及对照组小鼠颌下腺中均有表达，且随月龄或病程延长呈减弱趋势。PCNA表达逐渐减弱，糖尿病组较对照组明显降低，说明糖尿病可能导致颌下腺腺体增殖活动的减弱。这与临床糖尿病患者随病程延长而逐渐加重的口干、口渴症状相一致。以上结果经统计学分析，具有准确性高、可靠性强等优点。技术关键在于动物模型的制作及染色技术，TUNEL原位标记技术的正确应用，设立相应对照组，提高结果的准确性。 　　推广应用情况及前景：本项研究取得成果后，旨在说明糖尿病时PCNA在颌下腺中表达及凋亡细胞的分布情况，为临床治疗糖尿病预防并发症提供相应的形态学及细胞因子的依据。为进一步研发治疗糖尿病新药、基因治疗糖尿病提供理论依据。

　　项目编号：200622005 　　糖尿病是危害人类健康的常见病及多发病，且呈逐年上升趋势。糖尿病随病情发展，可造成多个器官细胞增殖与凋亡的平衡破坏，导致器官的损伤及功能障碍。口渴、多饮是糖尿病典型临床症状之一，对于糖尿病口渴发生机理的研究，以往多集中于渗透压及抗利尿激素调节中枢方面及糖尿病性微血管病变方面。近年的动物实验发现，糖尿病时颌下腺分泌功能的明显降低可能与糖尿病病人的口干、口渴有关。本实验采用db/db自发性糖尿病小鼠颌下腺模型是国际、国内公认的良好动物模型，它的临床表现及病理改变与人类Ⅱ型糖尿病极为相似。本实验应用光学显微镜、免疫组化及TUNEL原位标记的方法，对糖尿病时小鼠颌下腺形态学改变、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的表达及凋亡细胞阳性率的变化进行动态观察，以期对糖尿病时小鼠颌下腺形态学改变、细胞增殖、细胞凋亡的研究，说明糖尿病时小鼠颌下腺细胞生存状态，阐明其功能降低的原因，明确糖尿病小鼠颌下腺功能损害与PCNA表达及细胞凋亡的关系，为糖尿病的临床治疗及基础研究提供实验依据。 　　2005年4月，我们与承德医学院及承德市政府机关门诊部等多名同志组成科研小组进行资料查询，试验设计；于2005年6月开始进行课题的研究，课题组的同志们和相关技术人员通力合作，历时一年的时间完成该项课题。 　　对象：选取3，4，6，8，10月龄db/db型小鼠，即表型肥胖、血糖高于10mmol/L小鼠，作为糖尿病组。对照组选取相应月龄的同种db/+m小鼠。每组5只，总计50只。 　　原理：SP法免疫组化染色：免疫组化技术是利用免抗鼠的PCNA的特异性抗体和抗原特异性结合的特点，通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂显示一定的颜色，借助荧光显微镜观察其颜色变化，从而在抗原抗体结合部位确定组织结构。PCNA在对照组及糖尿病组颌下腺的导管及腺泡细胞中均有PCNA免疫反应阳性细胞存在，尤以颗粒曲管中表达最强，阳性反应物质主要位于导管及腺泡细胞的细胞核中。采用TUNEL原位标记技术观测到凋亡细胞在对照组及糖尿病组的导管细胞、腺泡细胞中均有分布，导管细胞中分布较多，阳性反应物质分布在导管细胞、腺泡细胞的细胞核中。 　　统计学方法：结果判定按照Jin等描述的方法，每张切片随机观察至少300个细胞，计算阳性率。数据处理采用析因实验设计的方差分析，因素间有交互作用时，采用Duncan多组极差检验分析主效应的作用。 　　结果：随着糖尿病的发展，颌下腺组织出现腺体萎缩及实质细胞形态学改变；PCNA在对照组及糖尿病组颌下腺中均有表达。同月龄比较，对照组与糖尿病组的细胞阳性率，糖尿病组表达均低于对照组；不同月龄比较，PCNA细胞阳性率，对照组随月龄增大、糖尿病组随着病程延长均呈减弱趋势。糖尿病组PCNA表达减弱速度明显快于对照组。差异有统计学意义（P<0.01）。凋亡细胞在对照组及糖尿病组的导管细胞、腺泡细胞中均有分布，同月龄比较，糖尿病组凋亡细胞的阳性率高于对照组；不同月龄比较，凋亡细胞阳性率，对照组随月龄增大、糖尿病组随着病程延长均呈增强趋势，糖尿病组凋亡细胞的阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。 　　创新点及技术关键：本课题将db/db自发性糖尿病小鼠动物模型用于颌下腺的研究；PCNA在db/db自发性糖尿病组及对照组小鼠颌下腺中均有表达，且随月龄或病程延长呈减弱趋势。PCNA表达逐渐减弱，糖尿病组较对照组明显降低，说明糖尿病可能导致颌下腺腺体增殖活动的减弱。这与临床糖尿病患者随病程延长而逐渐加重的口干、口渴症状相一致。以上结果经统计学分析，具有准确性高、可靠性强等优点。技术关键在于动物模型的制作及染色技术，TUNEL原位标记技术的正确应用，设立相应对照组，提高结果的准确性。 　　推广应用情况及前景：本项研究取得成果后，旨在说明糖尿病时PCNA在颌下腺中表达及凋亡细胞的分布情况，为临床治疗糖尿病预防并发症提供相应的形态学及细胞因子的依据。为进一步研发治疗糖尿病新药、基因治疗糖尿病提供理论依据。