本课题采用肿瘤免疫学、分子生物学等多种研究手段，先以细胞因子诱导大鼠骨髓前体细胞获得树突状细胞（DC），并加以纯化和扩增；再与已转导有自杀基因（HSV1-tk基因）的卵巢癌细胞在体外相融合制备卵巢癌DC活疫苗。在体外实验及大鼠体内实验中研究此活疫苗的有效性和安全性问题，研究结果表明：该活疫苗能显著提高大鼠细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性，诱导高效的抗卵巢癌免疫保护和免疫治疗作用，并可通过自杀基因系统的控制发生凋亡而灭活。 　　本课题分为三个部分进行： 　　⑴、可控性卵巢癌DC活疫苗的制备及其免疫生物学特性的鉴定； 　　⑵、可控性卵巢癌DC活疫苗诱导抗卵巢癌免疫保护和免疫治疗作用； 　　⑶、可控性卵巢癌DC活疫苗的安全性研究。 　　分离大鼠Fischer344骨髓前体细胞，在细胞因子rrGM-CSF和rrIL-4的联合作用下，培养、扩增大鼠骨髓来源DC；以逆转录病毒为载体将自杀基因HSV1-tk基因转导入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19，并经过G418筛选获得阳性克隆NuTu-19/TK；以聚乙二醇法将DC与NuTu-19/TK融合制成卵巢癌/DC活疫苗，活疫苗经30 Gy60Co照射后，作为死疫苗，结果细胞融合率为（23.4±13.8）%，融合细胞呈典型的双阳性表现；活疫苗表达HSV1-tk基因，高表达表面分子OX6、B7-2、OX62和ICAM-1；死疫苗的表面分子表达降低，失去增殖能力，凋亡率显著升高；与死疫苗相比，活疫苗能明显刺激T细胞增殖，对亲本肿瘤细胞NuTu-19有显著的杀伤作用。 　　经活疫苗免疫的大鼠脾细胞毒性T淋巴细胞对NuTu-19细胞的杀伤活性比对照组显著增高。大鼠体内免疫保护实验结果表明，与对照组相比，经活疫苗免疫后大鼠的肿瘤发生率降低；成瘤时间延迟；肿瘤体积缩小，其作用强于死疫苗组。活疫苗组抑瘤率可达83.02%，而死疫苗组仅25.47%，差异有显著性意义。活疫苗组肿瘤组织有大片坏死灶及大量淋巴细胞浸润；肿瘤组织的凋亡率明显高于对照组。免疫治疗实验结果表明，与对照组相比，活疫苗治疗组大鼠的平均肿瘤体积明显缩小。活疫苗组抑瘤率可达86.24%，而死疫苗组仅34.39%，差异有显著性意义。活疫苗组肿瘤组织出现大片状坏死样结构及团簇样淋巴细胞浸润；肿瘤组织的凋亡率明显高于对照组。 　　在体外GCV对活疫苗的杀伤作用有时间依赖性和剂量依赖性；浓度为100g/ml的GCV对活疫苗的杀伤率可达88.42%；大于80%的活疫苗发生凋亡，显现细胞核浓缩、边集等现象。在体内实验中，大鼠经足垫皮下接种活疫苗后观察90天，活疫苗+生理盐水组共有3/5的大鼠注射部位出现低分化腺癌，其中一只有淋巴结和肺部肿瘤转移；而活疫苗+GCV组未见肿瘤形成及转移。将活疫苗以荧光染料标记后进行大鼠体内示踪，结果荧光显微镜下见经红色荧光标记的活疫苗出现在大鼠脾脏，进一步原位细胞凋亡检测显示，经过腹腔注射GCV组的活疫苗已为凋亡细胞。 　　总之，携带有自杀基因的卵巢癌/DC融合活疫苗具有高效的抗肿瘤免疫保护和免疫治疗作用，并可经HSV1-tk/GCV系统有效控制疫苗的存活状态，从而增强肿瘤疫苗的安全性。 　　本课题成果有效地增强了疫苗的抗肿瘤免疫效应，并增强了肿瘤活疫苗的安全性。为此类疫苗将来转入临床试验，作为恶性肿瘤的辅助治疗手段用于防止手术后的复发和转移，最终提高临床疗效打下良好的前期实验基础。本课题在肿瘤疫苗的研制领域有广阔的应用前景，经过临床前实验后，有望应用于相应的肿瘤防治单位，从而造福广大肿瘤患者。

　　本课题采用肿瘤免疫学、分子生物学等多种研究手段，先以细胞因子诱导大鼠骨髓前体细胞获得树突状细胞（DC），并加以纯化和扩增；再与已转导有自杀基因（HSV1-tk基因）的卵巢癌细胞在体外相融合制备卵巢癌DC活疫苗。在体外实验及大鼠体内实验中研究此活疫苗的有效性和安全性问题，研究结果表明：该活疫苗能显著提高大鼠细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性，诱导高效的抗卵巢癌免疫保护和免疫治疗作用，并可通过自杀基因系统的控制发生凋亡而灭活。 　　本课题分为三个部分进行： 　　⑴、可控性卵巢癌DC活疫苗的制备及其免疫生物学特性的鉴定； 　　⑵、可控性卵巢癌DC活疫苗诱导抗卵巢癌免疫保护和免疫治疗作用； 　　⑶、可控性卵巢癌DC活疫苗的安全性研究。 　　分离大鼠Fischer344骨髓前体细胞，在细胞因子rrGM-CSF和rrIL-4的联合作用下，培养、扩增大鼠骨髓来源DC；以逆转录病毒为载体将自杀基因HSV1-tk基因转导入大鼠卵巢癌细胞株NuTu-19，并经过G418筛选获得阳性克隆NuTu-19/TK；以聚乙二醇法将DC与NuTu-19/TK融合制成卵巢癌/DC活疫苗，活疫苗经30 Gy60Co照射后，作为死疫苗，结果细胞融合率为（23.4±13.8）%，融合细胞呈典型的双阳性表现；活疫苗表达HSV1-tk基因，高表达表面分子OX6、B7-2、OX62和ICAM-1；死疫苗的表面分子表达降低，失去增殖能力，凋亡率显著升高；与死疫苗相比，活疫苗能明显刺激T细胞增殖，对亲本肿瘤细胞NuTu-19有显著的杀伤作用。 　　经活疫苗免疫的大鼠脾细胞毒性T淋巴细胞对NuTu-19细胞的杀伤活性比对照组显著增高。大鼠体内免疫保护实验结果表明，与对照组相比，经活疫苗免疫后大鼠的肿瘤发生率降低；成瘤时间延迟；肿瘤体积缩小，其作用强于死疫苗组。活疫苗组抑瘤率可达83.02%，而死疫苗组仅25.47%，差异有显著性意义。活疫苗组肿瘤组织有大片坏死灶及大量淋巴细胞浸润；肿瘤组织的凋亡率明显高于对照组。免疫治疗实验结果表明，与对照组相比，活疫苗治疗组大鼠的平均肿瘤体积明显缩小。活疫苗组抑瘤率可达86.24%，而死疫苗组仅34.39%，差异有显著性意义。活疫苗组肿瘤组织出现大片状坏死样结构及团簇样淋巴细胞浸润；肿瘤组织的凋亡率明显高于对照组。 　　在体外GCV对活疫苗的杀伤作用有时间依赖性和剂量依赖性；浓度为100g/ml的GCV对活疫苗的杀伤率可达88.42%；大于80%的活疫苗发生凋亡，显现细胞核浓缩、边集等现象。在体内实验中，大鼠经足垫皮下接种活疫苗后观察90天，活疫苗+生理盐水组共有3/5的大鼠注射部位出现低分化腺癌，其中一只有淋巴结和肺部肿瘤转移；而活疫苗+GCV组未见肿瘤形成及转移。将活疫苗以荧光染料标记后进行大鼠体内示踪，结果荧光显微镜下见经红色荧光标记的活疫苗出现在大鼠脾脏，进一步原位细胞凋亡检测显示，经过腹腔注射GCV组的活疫苗已为凋亡细胞。 　　总之，携带有自杀基因的卵巢癌/DC融合活疫苗具有高效的抗肿瘤免疫保护和免疫治疗作用，并可经HSV1-tk/GCV系统有效控制疫苗的存活状态，从而增强肿瘤疫苗的安全性。 　　本课题成果有效地增强了疫苗的抗肿瘤免疫效应，并增强了肿瘤活疫苗的安全性。为此类疫苗将来转入临床试验，作为恶性肿瘤的辅助治疗手段用于防止手术后的复发和转移，最终提高临床疗效打下良好的前期实验基础。本课题在肿瘤疫苗的研制领域有广阔的应用前景，经过临床前实验后，有望应用于相应的肿瘤防治单位，从而造福广大肿瘤患者。