课题来源与背景 　　哺乳动物卵巢颗粒细胞的体外培养方法，国外80年代开始摸索，90年代起逐步应用于毒理学研究。由于其费用低、周期短、易于重复，能直接观察化学物对性腺的毒效应，美国NTP1994和1995年度都将其列入研究规划。对卵巢颗粒细胞的培养方法及染毒模型，学者们报道各异，给推广应用带来一定困难，我们将其作为本研究的重点。 　　技术原理和性能指标 　　卵巢是女性重要的内分泌腺，也是外源性化学物重要的靶器官，其颗粒细胞负责由男性荷尔蒙向雌激素的转化及孕激素的合成。因此，雌激素和孕激素的分泌水平能直接反映颗粒细胞分泌功能，作为卵巢功能的评价指标之一，是本研究的主要性能指标。 　　技术的创造性与先进性 　　本研究系统比较了加与不加胰酶分离大鼠颗粒细胞数，比较了3种培养基的效果，观察了不同时间颗粒细胞分泌产物的分泌水平和加血清与否对分泌产物测定的影响，从而优化了大鼠卵巢颗粒细胞体外培养的条件，确定了分泌产物测定的最佳时机，国内外均未见报道。本研究选用3种已知或可疑生殖毒物作用于培养的大鼠卵巢颗粒细胞，观察其对性腺的毒性作用，成功建立了化学毒物对颗粒细胞的体外染毒模型，并用其它生殖毒性检测方法对本方法进行了验证，获得了一致结果。阿维菌素对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内外均未见报道。醋酸铅对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内未见报道。TCDD对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内未见报道。 　　技术的成熟程度：实验人员已熟练掌握本研究方法，分离细胞数充足，细胞存活率可达85%，分泌产物(雌二醇、孕酮)测定结果稳定。 　　适用范围和安全性：卵巢颗粒细胞体外培养方法可用于生殖毒物的筛检、生殖毒性作用机制的探讨、妇科疾病机理的研究、计划生育药物药效的观察。方法安全、简单、快速，重现性好，易于观察实验结果，并且作为技术平台可以开展细胞和分子水平的研究，在生殖毒理、药理学方面具有广阔的应用前景。

　　课题来源与背景 　　哺乳动物卵巢颗粒细胞的体外培养方法，国外80年代开始摸索，90年代起逐步应用于毒理学研究。由于其费用低、周期短、易于重复，能直接观察化学物对性腺的毒效应，美国NTP1994和1995年度都将其列入研究规划。对卵巢颗粒细胞的培养方法及染毒模型，学者们报道各异，给推广应用带来一定困难，我们将其作为本研究的重点。 　　技术原理和性能指标 　　卵巢是女性重要的内分泌腺，也是外源性化学物重要的靶器官，其颗粒细胞负责由男性荷尔蒙向雌激素的转化及孕激素的合成。因此，雌激素和孕激素的分泌水平能直接反映颗粒细胞分泌功能，作为卵巢功能的评价指标之一，是本研究的主要性能指标。 　　技术的创造性与先进性 　　本研究系统比较了加与不加胰酶分离大鼠颗粒细胞数，比较了3种培养基的效果，观察了不同时间颗粒细胞分泌产物的分泌水平和加血清与否对分泌产物测定的影响，从而优化了大鼠卵巢颗粒细胞体外培养的条件，确定了分泌产物测定的最佳时机，国内外均未见报道。本研究选用3种已知或可疑生殖毒物作用于培养的大鼠卵巢颗粒细胞，观察其对性腺的毒性作用，成功建立了化学毒物对颗粒细胞的体外染毒模型，并用其它生殖毒性检测方法对本方法进行了验证，获得了一致结果。阿维菌素对大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内外均未见报道。醋酸铅对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内未见报道。TCDD对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响，国内未见报道。 　　技术的成熟程度：实验人员已熟练掌握本研究方法，分离细胞数充足，细胞存活率可达85%，分泌产物(雌二醇、孕酮)测定结果稳定。 　　适用范围和安全性：卵巢颗粒细胞体外培养方法可用于生殖毒物的筛检、生殖毒性作用机制的探讨、妇科疾病机理的研究、计划生育药物药效的观察。方法安全、简单、快速，重现性好，易于观察实验结果，并且作为技术平台可以开展细胞和分子水平的研究，在生殖毒理、药理学方面具有广阔的应用前景。