1.本研究系统观察了分别包装有HBV–C,S,X抗原的重组腺相关病毒刺激外周血单核细胞后,应用不同细胞生长因子,作用不同时间对其成熟为树突状细胞(DC)的影响,建立了一整套在体外分离外周血单核细胞进而以最优化方式培养为DC的方法,为今后体外分离培养DC提供了最优方案。
2.证实了重组腺相关病毒AAV/HBV–S, C, X可以转化90%以上的树突状细胞,比蛋白/多肽刺激或其他方法效率显著提高,同时由于AAV自身具有可以与宿主细胞染色体发生整合的特点,实现了外源蛋白的持续表达,为今后以AAV为载体的抗乙肝基因治疗奠定了一定的实验基础。
3.比较了三种HBV的主要抗原S, C, X,HBV–C刺激树突状细胞后产生的CTL对HBV感染的靶细胞的杀伤作用,实验结果证实HBV–C刺激可以达到最好的特异性免疫杀伤作用,为下一步应用于临床的基于树突状细胞的抗乙肝治疗的刺激源的选择明确了方向。
4.比较了慢性乙肝病人与健康人之间对相同抗原刺激所产生的不同的细胞毒杀伤作用,初步证实了慢性乙肝病人DC在提呈HBV抗原过程中的功能缺陷,为今后开展大样本的实验摸索了方法;同时由于免疫耐受期的病人经重组AAV/HBV刺激DC后引起的特异性CTL的杀伤率虽然比对照组有显著提高,但是仍然低于正常人的杀伤率,提示虽然在体外刺激了树突状细胞的功能有所提高,但还是不能完全打破免疫耐受,为今后抗乙肝治疗新靶点的选择或是应用基因治疗的病人的治疗提出了新的选择。 |