本项目从“肺脏基质细胞组成的微环境/树突状细胞（Dendritic cells，DC）相互作用”的角度入手，以免疫微环境可影响DC的分化发育为依据，拟进一步深入研究肺脏基质细胞对mDC分化发育的影响及调控机制，并观察诱导后细胞的表型、细胞因子分泌谱，吞噬能力其及对T细胞增殖影响。 　　研究内容： 　　1、肺脏基质细胞采用肺组织块贴壁法原代培养，细胞鉴定： 　　（1）细胞形态，倒置显微镜下及HE染色后光镜下观察细胞呈梭形、三角形，胞体细长，可相互连接成网或紧缩成束状。 　　（2）免疫细胞学染色后见细胞胞质中表达波形蛋白，且阳性率较高。 　　（3）RT-PCR检测细胞表达TGF-β，VEGF两种抑制性细胞因子。 　　2、培养骨髓来源的成熟DC，流式检测细胞膜表面分子表达及吞噬FITC-OVA的荧光强度、ELISA法检测细胞因子分泌谱、MTT法观察成熟DC刺激T细胞增殖的能力；并用肺脏基质细胞培养上清与成熟DC共培养诱导其分化发育。 　　3、通过检测肺脏基质细胞上清对成熟DC诱导后的DC表型、细胞因子、吞噬功能的变化，观察诱导后的DC能否通过直接抑制T细胞的增殖来调节免疫应答，来确定肺脏基质细胞能否诱导成熟DC分化发育为调节性DC。 　　我们在下一步的研究中，将在以下几个方面进行研究： 　　1、进一步明确肺脏基质细胞诱导成熟DC分化发育为调节性DC的机制。 　　2、进一步探索诱导后调节性DC免疫调节的机制。 　　树突状细胞（Dendritic cell，DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞，具有启动机体免疫应答和诱导免疫耐受的双重调节作用。因此，DC很有可能成为免疫治疗的有力工具和靶点。 　　一直以来，自身免疫性疾病和器官移植排斥的治疗是采用免疫抑制剂来减低免疫反应以求控制疾病的发展和抑制排斥。但使用免疫抑制剂会出现许多并发症如：机会性感染，发生肿瘤，影响儿童生长发育等，还会给患者带来沉重的经济负担。而采用诱导免疫耐受的方法可减少或不用免疫抑制剂，对临床治疗有重要意义。DC是重要的免疫调节细胞，它在免疫耐受的诱导和维持上起着重要的作用，可以在不降低机体免疫力的情况下，通过使机体产生特异性耐受来达到治疗目的。随着对DC诱导免疫耐受研究的深入，我们在机体中发现了调节性DC，这是一群具有免疫负向调控作用DC的总称，具有多样性和可塑性的细胞群体，即机体为维持免疫平衡将不同来源及成熟阶段的DC在不同微环境影响下分化发育为调节性DC。因此明确机体微环境对DC分化发育的调节以及调节性DC对免疫耐受诱导的机制，将为高效，精确的免疫耐受诱导方法用于临床提供了免疫理论学基础，也同时为临床治疗开辟了广阔的道路。 　　机体不同微环境在调节DC分化和调控免疫上有重要作用及不同的机制。因此，结合微环境研究DC的免疫耐受性，并应用基因工程手段选择在体内抑制DC成熟的免疫抑制分子基因修饰DC来提高其耐受源性，诱导机体同种抗原特异性免疫耐受具有重要的意义。进一步深入研究高效免疫抑制分子基因修饰诱导耐受性树突状细胞，及诱导免疫耐受的治疗方案，可能是提高移植排斥，控制自身免疫性疾病治疗效果的可行方法之一。 　　本课题研究成果将通过： 　　1、发表学术论文； 　　2、参加学术会议进行交流等形式进行推广。 　　我们在下一步的研究中，将在以下几个方面进行研究： 　　1、进一步明确肺脏基质细胞诱导成熟DC分化发育为调节性DC的机制。 　　2、进一步探索诱导后调节性DC免疫调节的机制。

　　本项目从“肺脏基质细胞组成的微环境/树突状细胞（Dendritic cells，DC）相互作用”的角度入手，以免疫微环境可影响DC的分化发育为依据，拟进一步深入研究肺脏基质细胞对mDC分化发育的影响及调控机制，并观察诱导后细胞的表型、细胞因子分泌谱，吞噬能力其及对T细胞增殖影响。 　　研究内容： 　　1、肺脏基质细胞采用肺组织块贴壁法原代培养，细胞鉴定： 　　（1）细胞形态，倒置显微镜下及HE染色后光镜下观察细胞呈梭形、三角形，胞体细长，可相互连接成网或紧缩成束状。 　　（2）免疫细胞学染色后见细胞胞质中表达波形蛋白，且阳性率较高。 　　（3）RT-PCR检测细胞表达TGF-β，VEGF两种抑制性细胞因子。 　　2、培养骨髓来源的成熟DC，流式检测细胞膜表面分子表达及吞噬FITC-OVA的荧光强度、ELISA法检测细胞因子分泌谱、MTT法观察成熟DC刺激T细胞增殖的能力；并用肺脏基质细胞培养上清与成熟DC共培养诱导其分化发育。 　　3、通过检测肺脏基质细胞上清对成熟DC诱导后的DC表型、细胞因子、吞噬功能的变化，观察诱导后的DC能否通过直接抑制T细胞的增殖来调节免疫应答，来确定肺脏基质细胞能否诱导成熟DC分化发育为调节性DC。 　　我们在下一步的研究中，将在以下几个方面进行研究： 　　1、进一步明确肺脏基质细胞诱导成熟DC分化发育为调节性DC的机制。 　　2、进一步探索诱导后调节性DC免疫调节的机制。 　　树突状细胞（Dendritic cell，DC）是体内功能最强的抗原提呈细胞，具有启动机体免疫应答和诱导免疫耐受的双重调节作用。因此，DC很有可能成为免疫治疗的有力工具和靶点。 　　一直以来，自身免疫性疾病和器官移植排斥的治疗是采用免疫抑制剂来减低免疫反应以求控制疾病的发展和抑制排斥。但使用免疫抑制剂会出现许多并发症如：机会性感染，发生肿瘤，影响儿童生长发育等，还会给患者带来沉重的经济负担。而采用诱导免疫耐受的方法可减少或不用免疫抑制剂，对临床治疗有重要意义。DC是重要的免疫调节细胞，它在免疫耐受的诱导和维持上起着重要的作用，可以在不降低机体免疫力的情况下，通过使机体产生特异性耐受来达到治疗目的。随着对DC诱导免疫耐受研究的深入，我们在机体中发现了调节性DC，这是一群具有免疫负向调控作用DC的总称，具有多样性和可塑性的细胞群体，即机体为维持免疫平衡将不同来源及成熟阶段的DC在不同微环境影响下分化发育为调节性DC。因此明确机体微环境对DC分化发育的调节以及调节性DC对免疫耐受诱导的机制，将为高效，精确的免疫耐受诱导方法用于临床提供了免疫理论学基础，也同时为临床治疗开辟了广阔的道路。 　　机体不同微环境在调节DC分化和调控免疫上有重要作用及不同的机制。因此，结合微环境研究DC的免疫耐受性，并应用基因工程手段选择在体内抑制DC成熟的免疫抑制分子基因修饰DC来提高其耐受源性，诱导机体同种抗原特异性免疫耐受具有重要的意义。进一步深入研究高效免疫抑制分子基因修饰诱导耐受性树突状细胞，及诱导免疫耐受的治疗方案，可能是提高移植排斥，控制自身免疫性疾病治疗效果的可行方法之一。 　　本课题研究成果将通过： 　　1、发表学术论文； 　　2、参加学术会议进行交流等形式进行推广。 　　我们在下一步的研究中，将在以下几个方面进行研究： 　　1、进一步明确肺脏基质细胞诱导成熟DC分化发育为调节性DC的机制。 　　2、进一步探索诱导后调节性DC免疫调节的机制。