近年来阴沟肠杆菌已成为医院感染的重要病原菌，对β内酰胺类和氨基糖苷类在内的常用药物出现严重的多重耐药性，并常导致严重的医院感染，导致抗感染治疗相当困难。因此，明确阴沟肠杆菌的耐药性及耐药机制，对指导临床用药有着十分重要的社会效益和经济效益。目前发达国家均采用分子生物学方法 ，研究本国不同地区的耐药趋势以及耐药菌株的突变类型，以便采取必要的措施和对策。 　　通过本项目的系统研究，有望了解国内阴沟肠杆菌各种耐药相关基因的流行状况，从遗传学角度阐明耐药的分子机制，为指导临床正确应用抗菌药物和消毒剂，有效控制耐药基因的传播提供理论及实验依据。 　　一、方法： 　　1．实验菌株： 　　A组（30株）：分离自无锡市第一人民医院2003年9月～2004年2月住院患者送检的各种标本，其中痰液28份、伤口分泌物2份。B组（44株）：分离自浙江湖州解放军第98医院2003年9月～2004年4月住院患者送检的各种标本，其中痰液16份、伤口分泌物25份、血液2份、脑脊液1份。 　　2．细菌培养、鉴定和保存： 　　细菌培养根据临床检验操作规程按常规方法进行，鉴定采用API20 E鉴定菌种；将细菌接种在菌种保存管中，置-40℃冰箱保存，以备进行分子生物学检测。 　　3．抗菌药物敏感性试验： 　　微量肉汤稀释法，采用生物－梅里埃公司产品ATB G-5药敏试验板，共测试20种抗菌药物，分别为阿莫西林、阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦、替卡西林、替卡西林／克拉维酸、头孢噻吩、头孢西丁、头孢呋肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、复方新诺明、环丙沙星，按CLSI 2006标准操作及判断结果。 　　4．PCR模板提取： 　　挑菌落少许置入内含50﹕l裂解液（0.5﹪非离子去污剂NP40配制的400ng/ml蛋白酶K）中，置55℃水浴消化1h，改置95℃水浴灭活10min，15000r/min 30s，上清液即为耐药基因PCR模板液。 　　5．耐药基因的检测： 　　根据美国国立生物信息中心（NCBI）[网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/]中已发布的21种靶基因（包括β内酰胺酶（BLA）基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、磺胺类耐药基因、qnr基因、qac E△1基因、整合酶基因intI1）序列设计引物，采用PCR检测。 　　6．耐药基因核苷酸序列测定及分析： 　　扩增的耐药基因PCR产物经纯化后用ABI自动DNA序列分析仪进行序列测定，所测序列与GenBank已登录的基因进行序列比较、同源性分析，并将部分基因核酸序列登录GenBank。 　　二、结果 　　1．两家医院阴沟肠杆菌除对亚胺培南和美罗培南全部敏感外，对其它药物的耐药率在44.6﹪～94.6﹪之间，对20种抗菌药物耐药性严重。 　　2．阴沟肠杆菌BLA基因携带率高(90.5﹪)，其中ACT型检出率最高(66.2﹪)。国内首次在阴沟肠杆菌中检出质粒型AmpC ACT基因，并为一种新发现的ACT亚型（ACT-1 like）。国内外首次在阴沟肠杆菌中检出OXA-1型BLA基因。 　　3．阴沟肠杆菌AMEs基因携带率高（75.7﹪），其中aac(6′)-Ⅰ检出率最高(64.9﹪)。国内外首次在阴沟肠杆菌中检出AAC (6′)-Ib-cr双功能酶基因。 　　4．国内首次在阴沟肠杆菌中检出质粒介导的喹诺酮类耐药qnrA基因。 　　5.Ⅰ类整合子广泛存在于阴沟肠杆菌中，整合子阳性细菌耐药率明显高于整合子阴性细菌，整合子与阴沟肠杆菌的耐药和多重耐药有关。 　　6.阴沟肠杆菌磺胺类和消毒剂耐药基因携带率高。国内首次对临床菌株进行磺胺类耐药基因研究。 　　查新结论： 　　本课题采用PCR及序列分析方法对临床分离的74株阴沟肠杆菌的6类21种耐药基因进行全面系统的研究，国内未见相同文献报道。本课题在国内最早报道了阴沟肠杆菌检出质粒介导的喹诺酮类耐药qnrA基因，并在阴沟肠杆菌发现了新的ACT亚型β内酰胺酶（ACT-1 like），在国内外最早报道了阴沟肠杆菌中检出OXA-1型β内酰胺酶基因、AAC (6′)-Ib-cr双功能酶基因。

　　近年来阴沟肠杆菌已成为医院感染的重要病原菌，对β内酰胺类和氨基糖苷类在内的常用药物出现严重的多重耐药性，并常导致严重的医院感染，导致抗感染治疗相当困难。因此，明确阴沟肠杆菌的耐药性及耐药机制，对指导临床用药有着十分重要的社会效益和经济效益。目前发达国家均采用分子生物学方法 ，研究本国不同地区的耐药趋势以及耐药菌株的突变类型，以便采取必要的措施和对策。 　　通过本项目的系统研究，有望了解国内阴沟肠杆菌各种耐药相关基因的流行状况，从遗传学角度阐明耐药的分子机制，为指导临床正确应用抗菌药物和消毒剂，有效控制耐药基因的传播提供理论及实验依据。 　　一、方法： 　　1．实验菌株： 　　A组（30株）：分离自无锡市第一人民医院2003年9月～2004年2月住院患者送检的各种标本，其中痰液28份、伤口分泌物2份。B组（44株）：分离自浙江湖州解放军第98医院2003年9月～2004年4月住院患者送检的各种标本，其中痰液16份、伤口分泌物25份、血液2份、脑脊液1份。 　　2．细菌培养、鉴定和保存： 　　细菌培养根据临床检验操作规程按常规方法进行，鉴定采用API20 E鉴定菌种；将细菌接种在菌种保存管中，置-40℃冰箱保存，以备进行分子生物学检测。 　　3．抗菌药物敏感性试验： 　　微量肉汤稀释法，采用生物－梅里埃公司产品ATB G-5药敏试验板，共测试20种抗菌药物，分别为阿莫西林、阿莫西林／克拉维酸、哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦、替卡西林、替卡西林／克拉维酸、头孢噻吩、头孢西丁、头孢呋肟、头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、复方新诺明、环丙沙星，按CLSI 2006标准操作及判断结果。 　　4．PCR模板提取： 　　挑菌落少许置入内含50﹕l裂解液（0.5﹪非离子去污剂NP40配制的400ng/ml蛋白酶K）中，置55℃水浴消化1h，改置95℃水浴灭活10min，15000r/min 30s，上清液即为耐药基因PCR模板液。 　　5．耐药基因的检测： 　　根据美国国立生物信息中心（NCBI）[网址：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/]中已发布的21种靶基因（包括β内酰胺酶（BLA）基因、氨基糖苷类修饰酶（AMEs）基因、磺胺类耐药基因、qnr基因、qac E△1基因、整合酶基因intI1）序列设计引物，采用PCR检测。 　　6．耐药基因核苷酸序列测定及分析： 　　扩增的耐药基因PCR产物经纯化后用ABI自动DNA序列分析仪进行序列测定，所测序列与GenBank已登录的基因进行序列比较、同源性分析，并将部分基因核酸序列登录GenBank。 　　二、结果 　　1．两家医院阴沟肠杆菌除对亚胺培南和美罗培南全部敏感外，对其它药物的耐药率在44.6﹪～94.6﹪之间，对20种抗菌药物耐药性严重。 　　2．阴沟肠杆菌BLA基因携带率高(90.5﹪)，其中ACT型检出率最高(66.2﹪)。国内首次在阴沟肠杆菌中检出质粒型AmpC ACT基因，并为一种新发现的ACT亚型（ACT-1 like）。国内外首次在阴沟肠杆菌中检出OXA-1型BLA基因。 　　3．阴沟肠杆菌AMEs基因携带率高（75.7﹪），其中aac(6′)-Ⅰ检出率最高(64.9﹪)。国内外首次在阴沟肠杆菌中检出AAC (6′)-Ib-cr双功能酶基因。 　　4．国内首次在阴沟肠杆菌中检出质粒介导的喹诺酮类耐药qnrA基因。 　　5.Ⅰ类整合子广泛存在于阴沟肠杆菌中，整合子阳性细菌耐药率明显高于整合子阴性细菌，整合子与阴沟肠杆菌的耐药和多重耐药有关。 　　6.阴沟肠杆菌磺胺类和消毒剂耐药基因携带率高。国内首次对临床菌株进行磺胺类耐药基因研究。 　　查新结论： 　　本课题采用PCR及序列分析方法对临床分离的74株阴沟肠杆菌的6类21种耐药基因进行全面系统的研究，国内未见相同文献报道。本课题在国内最早报道了阴沟肠杆菌检出质粒介导的喹诺酮类耐药qnrA基因，并在阴沟肠杆菌发现了新的ACT亚型β内酰胺酶（ACT-1 like），在国内外最早报道了阴沟肠杆菌中检出OXA-1型β内酰胺酶基因、AAC (6′)-Ib-cr双功能酶基因。