本项目的主要内容是初步证明本实验室分离提取的人谷氧还蛋白1（Grx1）对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡具有保护作用，并且该保护作用可能是通过抑制细胞凋亡而实现的；并初步探讨Grx抑制细胞凋亡作用的机制可能是通过调节JNK及Akt信号途径实现的。根据研究计划和本课题的需要，我们主要进行了下列研究工作： 1、细胞培养条件的建立：培养人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）。 2、建立高糖诱导的血管内皮细胞凋亡模型。 3、细胞活力检测：MTT实验观察高糖对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。 4、Grx抗细胞凋亡的检测：通过Hoechst 33258染色，荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；用ELISA法、流式细胞术观察Grx对细胞凋亡的保护作用。 5、Akt、JNK表达水平的检测：利用RT-PCR、Western bloting方法分析Grx对Akt、JNK mRNA水平和蛋白水平表达的影响。 血管内皮细胞损伤为糖尿病血管病变的原发性因素，高血糖可引起氧化应激并导致细胞凋亡。氧化应激可产生谷胱甘肽化蛋白质（Pr-S-S-G）结构，细胞中Pr-S-S-G的堆积是引起细胞凋亡损伤及衰老途径的启动因子。谷氧还蛋白（Grx）催化Pr-S-S-G还原的效力及特异性高，对其作用机制的阐明将有助于探讨氧化应激和谷胱甘肽化蛋白质在各种相关疾病中的作用。下一步研究工作继续对谷氧还蛋白（Grx）作用机制进行阐明，深入探索氧化应激和谷胱甘肽化蛋白质在各种相关疾病中的作用，在分子水平上明确Grx作用的分子机制及靶点。

本项目的主要内容是初步证明本实验室分离提取的人谷氧还蛋白1（Grx1）对高糖诱导的血管内皮细胞凋亡具有保护作用，并且该保护作用可能是通过抑制细胞凋亡而实现的；并初步探讨Grx抑制细胞凋亡作用的机制可能是通过调节JNK及Akt信号途径实现的。根据研究计划和本课题的需要，我们主要进行了下列研究工作： 1、细胞培养条件的建立：培养人脐静脉内皮细胞（ECV304细胞）。 2、建立高糖诱导的血管内皮细胞凋亡模型。 3、细胞活力检测：MTT实验观察高糖对人脐静脉内皮细胞增殖的影响。 4、Grx抗细胞凋亡的检测：通过Hoechst 33258染色，荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化；用ELISA法、流式细胞术观察Grx对细胞凋亡的保护作用。 5、Akt、JNK表达水平的检测：利用RT-PCR、Western bloting方法分析Grx对Akt、JNK mRNA水平和蛋白水平表达的影响。 血管内皮细胞损伤为糖尿病血管病变的原发性因素，高血糖可引起氧化应激并导致细胞凋亡。氧化应激可产生谷胱甘肽化蛋白质（Pr-S-S-G）结构，细胞中Pr-S-S-G的堆积是引起细胞凋亡损伤及衰老途径的启动因子。谷氧还蛋白（Grx）催化Pr-S-S-G还原的效力及特异性高，对其作用机制的阐明将有助于探讨氧化应激和谷胱甘肽化蛋白质在各种相关疾病中的作用。下一步研究工作继续对谷氧还蛋白（Grx）作用机制进行阐明，深入探索氧化应激和谷胱甘肽化蛋白质在各种相关疾病中的作用，在分子水平上明确Grx作用的分子机制及靶点。