考虑TSAb、TSBAb抗原决定簇在TSHR上分布特点，将hTSHR-ecd粗略分三段即N端、C端、M段(中间段)研究。 1.基因克隆及表达载体构建：三个基因片段定向克隆插入载体pET102/D-His，成功构建了三种表达质粒，均经酶切和测序鉴定。 2.蛋白表达与纯化：热休克法将载体分别转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达，产物为融合蛋白包涵体形式，经变性、Ni-NTA亲和层析纯化、复性获产品。三种融合蛋白(TrxFus-hTSHRn，m，c)纯化纯度均＞90%，分子量：37.33KD、30.75KD、28.96KD，符合估算。产率：20.6、35.4和28.3mg/L培养基。 3.重组蛋白免疫活性鉴定：以重组蛋白为抗原，GD、HT及正常人血清为一抗，用ELISA测定TSAb、TSBAb与三种重组蛋白的结合特性，了解结合位点的分布。两组血清与两端重组蛋白特异结合均明显高于正常(p＜0.05)。表明两端蛋白都有TSAb和TSBAb结合位点且TSAb在N端占优势(p＜0.01)，TSBAb在C端占优势(p＜0.001)，M段为阴性。 4.建立检测TSAb、TSBAb ELISA方法：N端、C端重组蛋白为抗原分别建立了TSAb和TSBAb ELISA碱磷酶法，经与TSAbELISA商品药盒行相关分析，密切相关r＝0.742p＜0.05，检测95例GD血清阳性率83.3%，用TSBAbELISA检测35例HT血清阳性率94.2%，应用该二个方法检测健康对照229例，各类甲状腺病患者675例，包括初发Graves病（GD）451例、初发桥本氏病（HT）伴甲低104例、单纯性甲状腺肿35例、非毒性结节性甲状腺肿47例、亚急性淋巴细胞性甲状腺炎38例。 二个ELISA方法可检测人血清TRAb并可区分TSAb和TSBAb谁占优势，同批血样用此二个ELISA方法联合检测可提高阳性检出率（如GD阳性率可达93.3%，HT阳性率可达97.1%）。该方法灵敏、特异、精密，为临床AITD的诊断、辅助诊断、指导治疗及疗效观察提供了一种新型、准确、简便的方法。

考虑TSAb、TSBAb抗原决定簇在TSHR上分布特点，将hTSHR-ecd粗略分三段即N端、C端、M段(中间段)研究。 1.基因克隆及表达载体构建：三个基因片段定向克隆插入载体pET102/D-His，成功构建了三种表达质粒，均经酶切和测序鉴定。 2.蛋白表达与纯化：热休克法将载体分别转入大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达，产物为融合蛋白包涵体形式，经变性、Ni-NTA亲和层析纯化、复性获产品。三种融合蛋白(TrxFus-hTSHRn，m，c)纯化纯度均＞90%，分子量：37.33KD、30.75KD、28.96KD，符合估算。产率：20.6、35.4和28.3mg/L培养基。 3.重组蛋白免疫活性鉴定：以重组蛋白为抗原，GD、HT及正常人血清为一抗，用ELISA测定TSAb、TSBAb与三种重组蛋白的结合特性，了解结合位点的分布。两组血清与两端重组蛋白特异结合均明显高于正常(p＜0.05)。表明两端蛋白都有TSAb和TSBAb结合位点且TSAb在N端占优势(p＜0.01)，TSBAb在C端占优势(p＜0.001)，M段为阴性。 4.建立检测TSAb、TSBAb ELISA方法：N端、C端重组蛋白为抗原分别建立了TSAb和TSBAb ELISA碱磷酶法，经与TSAbELISA商品药盒行相关分析，密切相关r＝0.742p＜0.05，检测95例GD血清阳性率83.3%，用TSBAbELISA检测35例HT血清阳性率94.2%，应用该二个方法检测健康对照229例，各类甲状腺病患者675例，包括初发Graves病（GD）451例、初发桥本氏病（HT）伴甲低104例、单纯性甲状腺肿35例、非毒性结节性甲状腺肿47例、亚急性淋巴细胞性甲状腺炎38例。 二个ELISA方法可检测人血清TRAb并可区分TSAb和TSBAb谁占优势，同批血样用此二个ELISA方法联合检测可提高阳性检出率（如GD阳性率可达93.3%，HT阳性率可达97.1%）。该方法灵敏、特异、精密，为临床AITD的诊断、辅助诊断、指导治疗及疗效观察提供了一种新型、准确、简便的方法。