1．课题来源与背景：类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）主要病理改变是滑膜炎，关节滑膜细胞的增殖表现为类似恶性肿瘤细胞的特征，存在异常的凋亡过程。前期研究在体外细胞培养的条件下，通过光镜、电镜及流式细胞仪发现As2O3可以诱导滑膜细胞凋亡，本研究在此基础上探讨 As2O3诱导其凋亡的可能机制。 2．技术原理及性能指标：本研究在前期课题基础上，用酶联免疫吸附测定（ELISA）定量检测不同浓度As2O3对5例RA成纤维样滑膜细胞（ HLFS）分别作用6、24、48小时后释放到胞浆内的CytC含量；RT-PCR半定量测定一定浓度下的As2O3作用HFLS 48小时后细胞Caspase-3、Bcl-2mRNA表达，探讨As2O3诱导凋亡作用中线粒体改变带来的变化以及Bcl-2是否参加了对线粒体的调控。主要结果 (1) 凋亡过程中CytC释放增加。ELISA检测不同浓度的As2O3作用6小时后，胞浆内的CytC 较空白对照组升高，有统计学意义。药物作用24小时后CytC含量显著增高，并且在2-40μmol/L浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。(2) Caspase-3的活化表达可能是砷剂诱导凋亡的重要通路。RT-PCR检测发现不同浓度的As2O3作用HFLS 48小时后细胞中Caspase-3的mRNA表达显著增强，并且在2-40μmol/L浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。(3) Bcl-2基因表达参与了调控As2O3对HFLS 诱导凋亡过程。RT-PCR检测发现在2-40μmol/L浓度范围内的As2O3作用48小时后HFLS 的Bcl-2基因表达较空白对照组显著减弱，与药物剂量呈负相关。结论：AS2O3可能通过增加细胞色素C释放及促进Caspase-3mRNA表达，抑制Bcl-2mRNA表达诱导RA滑膜细胞凋亡。 3．技术的创造性与先进性：检测As2O3作用后，RA滑膜细胞CytC含量变化；RT-PCR半定量测定Caspase-3、Bcl-2mRNA表达，发现AS2O3可能通过增加细胞色素C释放及促进Caspase-3mRNA表达，抑制Bcl-2mRNA表达诱导RA滑膜细胞凋亡是本研究的创新点。 4．我们将进一步在实验中证实As2O3对RA滑膜细胞凋亡的诱导作用对RA临床的治疗价值。如果能够临床应用于RA的治疗，将为RA患者提供一种新的治疗药物。 我们将进一步在实验中证实As2O3对RA滑膜细胞凋亡的诱导作用对RA临床的治疗价值。包括检测滑膜细胞凋亡过程中survivin 的变化；及研究As2O3对关节炎动物模型的影响。如果能够临床应用于RA的治疗，将为RA患者提供一种新的治疗药物。

1．课题来源与背景：类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）主要病理改变是滑膜炎，关节滑膜细胞的增殖表现为类似恶性肿瘤细胞的特征，存在异常的凋亡过程。前期研究在体外细胞培养的条件下，通过光镜、电镜及流式细胞仪发现As2O3可以诱导滑膜细胞凋亡，本研究在此基础上探讨 As2O3诱导其凋亡的可能机制。 2．技术原理及性能指标：本研究在前期课题基础上，用酶联免疫吸附测定（ELISA）定量检测不同浓度As2O3对5例RA成纤维样滑膜细胞（ HLFS）分别作用6、24、48小时后释放到胞浆内的CytC含量；RT-PCR半定量测定一定浓度下的As2O3作用HFLS 48小时后细胞Caspase-3、Bcl-2mRNA表达，探讨As2O3诱导凋亡作用中线粒体改变带来的变化以及Bcl-2是否参加了对线粒体的调控。主要结果 (1) 凋亡过程中CytC释放增加。ELISA检测不同浓度的As2O3作用6小时后，胞浆内的CytC 较空白对照组升高，有统计学意义。药物作用24小时后CytC含量显著增高，并且在2-40μmol/L浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。(2) Caspase-3的活化表达可能是砷剂诱导凋亡的重要通路。RT-PCR检测发现不同浓度的As2O3作用HFLS 48小时后细胞中Caspase-3的mRNA表达显著增强，并且在2-40μmol/L浓度范围内其作用呈一定剂量依赖性。(3) Bcl-2基因表达参与了调控As2O3对HFLS 诱导凋亡过程。RT-PCR检测发现在2-40μmol/L浓度范围内的As2O3作用48小时后HFLS 的Bcl-2基因表达较空白对照组显著减弱，与药物剂量呈负相关。结论：AS2O3可能通过增加细胞色素C释放及促进Caspase-3mRNA表达，抑制Bcl-2mRNA表达诱导RA滑膜细胞凋亡。 3．技术的创造性与先进性：检测As2O3作用后，RA滑膜细胞CytC含量变化；RT-PCR半定量测定Caspase-3、Bcl-2mRNA表达，发现AS2O3可能通过增加细胞色素C释放及促进Caspase-3mRNA表达，抑制Bcl-2mRNA表达诱导RA滑膜细胞凋亡是本研究的创新点。 4．我们将进一步在实验中证实As2O3对RA滑膜细胞凋亡的诱导作用对RA临床的治疗价值。如果能够临床应用于RA的治疗，将为RA患者提供一种新的治疗药物。 我们将进一步在实验中证实As2O3对RA滑膜细胞凋亡的诱导作用对RA临床的治疗价值。包括检测滑膜细胞凋亡过程中survivin 的变化；及研究As2O3对关节炎动物模型的影响。如果能够临床应用于RA的治疗，将为RA患者提供一种新的治疗药物。