技术说明： （1）通过不同菌株在固体培养基上的生长实验，确定了Rim101蛋白是白念珠菌在碱性缺铁环境中生长必需蛋白，并且该蛋白的作用是pH依赖性的。 （2）通过构建LacZ报告基因与FRP1基因上游1kb启动子区的融合结构，检测在pH4和pH8，以及添加铁离子螯合剂BPS和富铁培养条件下野生型细胞中的LacZ的活性，确定了碱性条件造成的FRP1表达的上调是由于铁饥饿造成的。 （3）通过构建frp1-/-突变株，表型实验显示frp1基因的缺失影响白念珠菌的菌丝型生长，而且frp1-/-突变株不能在铁缺陷的固体培养基上生长。通过Northern杂交比较野生株和rim101-/-突变株在铁饥饿条件下FRP1基因的表达，从分子水平上来说明铁离子的浓度影响FRP1基因的表达，同时证明这种调控是依赖Rim101p。从而阐明了RIM101途径中FRP1靶点在适应中性—碱性pH中的作用。 （4）通过Northern杂交的方法检测野生型菌株中FRP1基因在缺铁和富铁条件下的表达变化。当培养基pH4或pH4+100μmol/L BPS+100μmol/L FeCl3富铁培养时，没有检测到FRP1的表达；当pH4+100μmol/L BPS低铁培养时，发现FRP1基因表达。当培养基的pH值升至8或pH8 +100μmol/L BPS缺铁培养时，FRP1基因表达；当pH8 +100μmol/L BPS +100μmol/L FeCl3富铁培养时，无法检测到FRP1的表达。 （5）通过对FRP1基因启动子的缺失分析、定点突变以及EMSA实验证明了Rim101p可以与启动子区的潜在结合位点相互作用，而且发现Rim101p主要通过与启动子-650处结合位点相互作用来调控FRP1的表达，同时表明还有其它元件参与FRP1的表达：上调元件分别位于-822至-437和-263至-124，下调元件位于-467至-263。 通过本课题的研究可以极大地增加我们对白念珠菌作为人体共生菌和病原菌是如何生存的认识和了解，对临床上治疗白念珠菌感染和药物开发具有重要的理论和实际意义。

技术说明： （1）通过不同菌株在固体培养基上的生长实验，确定了Rim101蛋白是白念珠菌在碱性缺铁环境中生长必需蛋白，并且该蛋白的作用是pH依赖性的。 （2）通过构建LacZ报告基因与FRP1基因上游1kb启动子区的融合结构，检测在pH4和pH8，以及添加铁离子螯合剂BPS和富铁培养条件下野生型细胞中的LacZ的活性，确定了碱性条件造成的FRP1表达的上调是由于铁饥饿造成的。 （3）通过构建frp1-/-突变株，表型实验显示frp1基因的缺失影响白念珠菌的菌丝型生长，而且frp1-/-突变株不能在铁缺陷的固体培养基上生长。通过Northern杂交比较野生株和rim101-/-突变株在铁饥饿条件下FRP1基因的表达，从分子水平上来说明铁离子的浓度影响FRP1基因的表达，同时证明这种调控是依赖Rim101p。从而阐明了RIM101途径中FRP1靶点在适应中性—碱性pH中的作用。 （4）通过Northern杂交的方法检测野生型菌株中FRP1基因在缺铁和富铁条件下的表达变化。当培养基pH4或pH4+100μmol/L BPS+100μmol/L FeCl3富铁培养时，没有检测到FRP1的表达；当pH4+100μmol/L BPS低铁培养时，发现FRP1基因表达。当培养基的pH值升至8或pH8 +100μmol/L BPS缺铁培养时，FRP1基因表达；当pH8 +100μmol/L BPS +100μmol/L FeCl3富铁培养时，无法检测到FRP1的表达。 （5）通过对FRP1基因启动子的缺失分析、定点突变以及EMSA实验证明了Rim101p可以与启动子区的潜在结合位点相互作用，而且发现Rim101p主要通过与启动子-650处结合位点相互作用来调控FRP1的表达，同时表明还有其它元件参与FRP1的表达：上调元件分别位于-822至-437和-263至-124，下调元件位于-467至-263。 通过本课题的研究可以极大地增加我们对白念珠菌作为人体共生菌和病原菌是如何生存的认识和了解，对临床上治疗白念珠菌感染和药物开发具有重要的理论和实际意义。