简要技术说明： 　　人类轮状病毒（Human Rotavirus）自1973年发现以来，已成为世界范围内儿童急性腹泻病最重要的病原之一，全世界儿童因腹泻住院者20﹪～70﹪是由轮状病毒感染引起的。 　　本研究的目的是为了指导临床和预防实践，轮状病毒(RV)的分子流行特征研究是认识轮状病毒的免疫保护机制和研究疫苗的基础，因此我们系统的对昆明地区5年的轮状病毒NSP4进行分子流行病学检测；在此基础上进一步研究了NSP4基因变异对毒力的影响以及与临床症状的相关性，并进一步用动物实验验证，使结论更具有科学性；在自然感染轮状病毒或接种轮状病毒疫苗后，均有较高的抗NSP4抗体，这就很难观察到轮状病毒感染后抗NSP4抗体和抗轮状病毒抗体的效果。为此，本研究进行了抗NSP4抗体对轮状病毒诱导腹泻不同阶段的干预作用研究，以了解抗NSP4抗体直接保护轮状病毒诱导腹泻的效果。 　　1.本研究从2002～2006年昆明地区婴幼儿腹泻的轮状病毒感染者大便样品中，通过RT-PCR，PCR扩增了60株轮状病毒株的NSP4全长基因及其cDNA序列，并对cDNA序列测序，发现这些病毒株同属Wa株轮状病毒株，它们的NSP4氨基酸序列高度保守，在79位、125、126、131、133、136、137、139位氨基酸位点存在差异。昆明地区5年轮状病毒分子流行病学研究说明，轮状病毒株的NSP4基因变异虽然不大，但有增强趋势，5年来所分析的毒株同源性在 97.7﹪～99.7﹪内，系统进化树分析，仍属Wa株轮状病毒毒株。对了解轮状病毒流行毒株的监测，对于疫苗的研制和免疫保护发挥着重要作用。 　　2.进行NSP4的基因变异和临床症状进行比较分析，和4株病毒的NSP4蛋白在ICR乳鼠中比较这两种蛋白致小鼠腹泻的差异。研究发现，NSP4变异对毒力影响不大，这个结果验证了临床研究结果，证明了针对NSP4进行轮状病毒的预防和治疗研究提供一个较好的切入点。 　　3.采用12天龄的ICR小鼠接种NSP4和轮状病毒全病毒颗粒诱导腹泻，和抗NSP4进行NSP4和轮状病毒全病毒接种前后的干预研究，并进行相应小肠的病理检测。 　　本研究首次报道抗NSP4抗体在轮状病毒腹泻不同病程中的干预作用，这对轮状病毒肠炎的预防和治疗提供了重要的资料。

　　简要技术说明： 　　人类轮状病毒（Human Rotavirus）自1973年发现以来，已成为世界范围内儿童急性腹泻病最重要的病原之一，全世界儿童因腹泻住院者20﹪～70﹪是由轮状病毒感染引起的。 　　本研究的目的是为了指导临床和预防实践，轮状病毒(RV)的分子流行特征研究是认识轮状病毒的免疫保护机制和研究疫苗的基础，因此我们系统的对昆明地区5年的轮状病毒NSP4进行分子流行病学检测；在此基础上进一步研究了NSP4基因变异对毒力的影响以及与临床症状的相关性，并进一步用动物实验验证，使结论更具有科学性；在自然感染轮状病毒或接种轮状病毒疫苗后，均有较高的抗NSP4抗体，这就很难观察到轮状病毒感染后抗NSP4抗体和抗轮状病毒抗体的效果。为此，本研究进行了抗NSP4抗体对轮状病毒诱导腹泻不同阶段的干预作用研究，以了解抗NSP4抗体直接保护轮状病毒诱导腹泻的效果。 　　1.本研究从2002～2006年昆明地区婴幼儿腹泻的轮状病毒感染者大便样品中，通过RT-PCR，PCR扩增了60株轮状病毒株的NSP4全长基因及其cDNA序列，并对cDNA序列测序，发现这些病毒株同属Wa株轮状病毒株，它们的NSP4氨基酸序列高度保守，在79位、125、126、131、133、136、137、139位氨基酸位点存在差异。昆明地区5年轮状病毒分子流行病学研究说明，轮状病毒株的NSP4基因变异虽然不大，但有增强趋势，5年来所分析的毒株同源性在 97.7﹪～99.7﹪内，系统进化树分析，仍属Wa株轮状病毒毒株。对了解轮状病毒流行毒株的监测，对于疫苗的研制和免疫保护发挥着重要作用。 　　2.进行NSP4的基因变异和临床症状进行比较分析，和4株病毒的NSP4蛋白在ICR乳鼠中比较这两种蛋白致小鼠腹泻的差异。研究发现，NSP4变异对毒力影响不大，这个结果验证了临床研究结果，证明了针对NSP4进行轮状病毒的预防和治疗研究提供一个较好的切入点。 　　3.采用12天龄的ICR小鼠接种NSP4和轮状病毒全病毒颗粒诱导腹泻，和抗NSP4进行NSP4和轮状病毒全病毒接种前后的干预研究，并进行相应小肠的病理检测。 　　本研究首次报道抗NSP4抗体在轮状病毒腹泻不同病程中的干预作用，这对轮状病毒肠炎的预防和治疗提供了重要的资料。