1.本课题的来源： 　　人精子膜抗原基因免疫及抗生育作用， 河南省科技厅自然科学项目，课题号为 111021800。 　　2.全球人口增长迅速，2006年已突破65亿，中国人口也已突破13.5亿，所以寻找一种安全、廉价、长效、可逆的避孕方法控制生育成为世界各国尤其是发展中国家生殖领域的研究重点。本研究构建pcDNA3.1(+)-hSAMP32和pcDNA3.1(+)-hPH-20真核表达载体，免疫动物观 察其对小鼠生育的影响，为研制DNA免疫避孕疫苗奠定实验和理论基础。 　　研究主要内容及结果如下： 　　（1）应用RT-PCR等分子生物学技术获得hSAMP32和hPH-20。将目的基因TA克隆，挑选阳性克隆测序，将测序正确的片段双酶切后分别连接至pcDNA3.1(+)真核表达载体构建基因疫苗真核表达载体； 　　（2）真核表达载体体外细胞转染：分别将pcDNA3.1(+)-hSAMP32和pcDNA3.1(+)-hPH-20 DNA体外转染NIH3T3细胞，利用原位杂交和免疫组织化学的方法检测到两基因mRNA和蛋白水平的表达； 　　（3）hSAMP32基因疫苗免疫动物实验：pcDNA3.1（+）-hSAMP32能明显降低小鼠受孕率下降至55﹪，并且在多个脏器未见目的基因的整合，为hSAMP32免疫避孕疫苗的研制奠定实验基础； 　　（4）hPH-20基因疫苗免疫动物实验：pcDNA3.1(+)-hPH20接种后，体外穿卵实验组80﹪穿卵未成功，小鼠生育率下降了77.8﹪，不育持续时间为3个月。为hPH-20免疫避孕疫苗的研制奠定实验基础； 　　（5）建立噬菌体基因特异性肽库，用ASA阳性血清淘选抗原表位所在的肽段。结果表明hSAMP32抗原表位在159-501bp(30-143AA)之间，hPH-20抗原表位在105-452bp（35-150AA）之间。 　　该研究为研制DNA免疫避孕疫苗奠定了实验和理论基础。

　　1.本课题的来源： 　　人精子膜抗原基因免疫及抗生育作用， 河南省科技厅自然科学项目，课题号为 111021800。 　　2.全球人口增长迅速，2006年已突破65亿，中国人口也已突破13.5亿，所以寻找一种安全、廉价、长效、可逆的避孕方法控制生育成为世界各国尤其是发展中国家生殖领域的研究重点。本研究构建pcDNA3.1(+)-hSAMP32和pcDNA3.1(+)-hPH-20真核表达载体，免疫动物观 察其对小鼠生育的影响，为研制DNA免疫避孕疫苗奠定实验和理论基础。 　　研究主要内容及结果如下： 　　（1）应用RT-PCR等分子生物学技术获得hSAMP32和hPH-20。将目的基因TA克隆，挑选阳性克隆测序，将测序正确的片段双酶切后分别连接至pcDNA3.1(+)真核表达载体构建基因疫苗真核表达载体； 　　（2）真核表达载体体外细胞转染：分别将pcDNA3.1(+)-hSAMP32和pcDNA3.1(+)-hPH-20 DNA体外转染NIH3T3细胞，利用原位杂交和免疫组织化学的方法检测到两基因mRNA和蛋白水平的表达； 　　（3）hSAMP32基因疫苗免疫动物实验：pcDNA3.1（+）-hSAMP32能明显降低小鼠受孕率下降至55﹪，并且在多个脏器未见目的基因的整合，为hSAMP32免疫避孕疫苗的研制奠定实验基础； 　　（4）hPH-20基因疫苗免疫动物实验：pcDNA3.1(+)-hPH20接种后，体外穿卵实验组80﹪穿卵未成功，小鼠生育率下降了77.8﹪，不育持续时间为3个月。为hPH-20免疫避孕疫苗的研制奠定实验基础； 　　（5）建立噬菌体基因特异性肽库，用ASA阳性血清淘选抗原表位所在的肽段。结果表明hSAMP32抗原表位在159-501bp(30-143AA)之间，hPH-20抗原表位在105-452bp（35-150AA）之间。 　　该研究为研制DNA免疫避孕疫苗奠定了实验和理论基础。