简要技术说明： 　　本研究采用体外两步灌流法分离树鼩/胎肝细胞，采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，在相差倒置显微镜观察细胞分离的纯度及培养状况，取生长旺盛期细胞与HCVRNA阳性血清混合培养，收集不同时相的培养细胞、培养上清进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测细胞内或上清中HCV-RNA，免疫组化检测细胞内HCV NS3、NS5、CP10特异性抗原的表达，以及原位杂交检测细胞内HCV RNA，相差显微镜、透射电镜、扫描电镜观察肝细胞形态学变化。多抗原肽免疫血清按照一定比例与HCV感染的树鼩肝细胞进行混合培养，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内或上清中HCV-RNA，免疫组化检测细胞内HCV NS3、NS5特异性抗原的表达，以及原位杂交检测细胞内HCV RNA，观察多抗原肽免疫血清体外阻断情况。 　　应用前景： 　　本研究共发表学术论著10篇，均为第一作者。参加全国性学术会议交流8篇。本研究用HCV-RNA阳性血清体外直接感染多种细胞，经逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、原位杂交法检测以及电镜观察等，证明HCV能够感染上述细胞，且在体外具有直接致细胞病变的作用。我们报道的HCV培养体系是一个操作性强、实用性广的，可作为一种研究HCV的技术平台，可用于HCV疫苗的制备、抗病毒药物的筛选、HCV后基因组学的深入研究。自2003年以来经南京军区福州总医院、福建省立医院、解放军第一八零医院、解放军第一七五医院、解放军第九二医院、解放军第九四医院等单位推广应用，认为本课题设计新颖、科学合理、结果稳定、重复性好、具有创新性和先进性，在许多方面处于国内领先或达到国际水平，值得进一步推广和应用。运用本体系在体外进行HCV生物学特性和发病机制的研究，疫苗制备、筛选抗病毒新药等方面缩短时间，降低成本，既方便又省时、经济，具有良好的社会、经济效益。

　　简要技术说明： 　　本研究采用体外两步灌流法分离树鼩/胎肝细胞，采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞，在相差倒置显微镜观察细胞分离的纯度及培养状况，取生长旺盛期细胞与HCVRNA阳性血清混合培养，收集不同时相的培养细胞、培养上清进行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测细胞内或上清中HCV-RNA，免疫组化检测细胞内HCV NS3、NS5、CP10特异性抗原的表达，以及原位杂交检测细胞内HCV RNA，相差显微镜、透射电镜、扫描电镜观察肝细胞形态学变化。多抗原肽免疫血清按照一定比例与HCV感染的树鼩肝细胞进行混合培养，用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内或上清中HCV-RNA，免疫组化检测细胞内HCV NS3、NS5特异性抗原的表达，以及原位杂交检测细胞内HCV RNA，观察多抗原肽免疫血清体外阻断情况。 　　应用前景： 　　本研究共发表学术论著10篇，均为第一作者。参加全国性学术会议交流8篇。本研究用HCV-RNA阳性血清体外直接感染多种细胞，经逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、原位杂交法检测以及电镜观察等，证明HCV能够感染上述细胞，且在体外具有直接致细胞病变的作用。我们报道的HCV培养体系是一个操作性强、实用性广的，可作为一种研究HCV的技术平台，可用于HCV疫苗的制备、抗病毒药物的筛选、HCV后基因组学的深入研究。自2003年以来经南京军区福州总医院、福建省立医院、解放军第一八零医院、解放军第一七五医院、解放军第九二医院、解放军第九四医院等单位推广应用，认为本课题设计新颖、科学合理、结果稳定、重复性好、具有创新性和先进性，在许多方面处于国内领先或达到国际水平，值得进一步推广和应用。运用本体系在体外进行HCV生物学特性和发病机制的研究，疫苗制备、筛选抗病毒新药等方面缩短时间，降低成本，既方便又省时、经济，具有良好的社会、经济效益。