本项目从2004年实施至今，对O139群霍乱弧菌的分子特征及其耐药性、耐药机理进行了深入的研究，主要是： （1）在国内首次自行设计4对引物，建立多重PCR方法。用该方法对宁波市2004～2006年分离的52株O139群霍乱弧菌展开CtxA、TcpA 、Zot 、ace 4种毒力基因的检测研究。结果证明，52株O139群霍乱弧菌，4种毒力基因均阳性，是为致病相关基因型A型，未发现B、C等其他型别菌株。并将多重PCR方法与单基因PCR进行对照研究，结果证明二种方法结果完全一致。多重PCR方法具有快速、敏感、特异等优点，可用于霍乱弧菌菌株毒力判定的快速诊断。 （2）本项目用PFGE（脉冲场凝胶电泳）分型技术对52株O139群霍乱弧菌作全基因组分型研究，该技术是目前公认的“金标准”分型方法，分型结果表明，52株菌株之间，出现约20条的条带，根据条带的位置和数量差别，参考Tenover方法，被分为5个型。分型发现，分别发生在2005年7月、10月宁海县的岔路、象山县的爵溪、鹤浦3起食源性霍乱暴发事件中所分离的28株菌株均为同一PFGE型，即P1型。证明它们来自同一传染源。而发生在2004年10月象山县丹东街道的1起食源性霍乱暴发的8株菌则均为P3型菌所引起，证明它们由另一传染源所引发。其他型别则为霍乱散发病例等所分离的菌株。这些PFGE分型结果证明，在霍乱的分子流行病学研究中，PFGE方法具有分辨力强，能为霍乱的溯源提供准确、可靠分子流行病学的证据。 （3）本项目使用RAPD（随机扩增多态性DNA分析技术）对52株O139群霍乱弧菌开展分型研究，结果52株菌株均出现7个清晰、明亮的条带，其分子量分别在350bp至1450bp之间，条带位置基本一致，据此可判断这些细菌为同一RAPD型别。我们的研究证明，PFGE分型方法的分辨力高于RAPD方法，但RAPD方法具有操作相对简便等特点。 （4）本项目开展了O139群霍乱弧菌耐药性及耐药基因的研究，发现本市这几年分离的O139霍乱弧菌耐药情况十分严重，大部分菌株出现多重耐药。并在国内首次报告在O139群霍乱弧菌检出β-内酰胺酶相关的耐药基因TEM-1，介导对氨苄西林和羧苄西林等的耐药。 （5）本项目对O139群霍乱弧菌CtxA毒力基因的核苷酸序列测定的研究，结果证明，52株O139群霍乱弧菌CtxA基因的核苷酸序列高度同源。序列的一致率为大于99.9﹪。 （6）本项目还开展了O139群霍乱弧菌1类整合子结构的研究。

本项目从2004年实施至今，对O139群霍乱弧菌的分子特征及其耐药性、耐药机理进行了深入的研究，主要是： （1）在国内首次自行设计4对引物，建立多重PCR方法。用该方法对宁波市2004～2006年分离的52株O139群霍乱弧菌展开CtxA、TcpA 、Zot 、ace 4种毒力基因的检测研究。结果证明，52株O139群霍乱弧菌，4种毒力基因均阳性，是为致病相关基因型A型，未发现B、C等其他型别菌株。并将多重PCR方法与单基因PCR进行对照研究，结果证明二种方法结果完全一致。多重PCR方法具有快速、敏感、特异等优点，可用于霍乱弧菌菌株毒力判定的快速诊断。 （2）本项目用PFGE（脉冲场凝胶电泳）分型技术对52株O139群霍乱弧菌作全基因组分型研究，该技术是目前公认的“金标准”分型方法，分型结果表明，52株菌株之间，出现约20条的条带，根据条带的位置和数量差别，参考Tenover方法，被分为5个型。分型发现，分别发生在2005年7月、10月宁海县的岔路、象山县的爵溪、鹤浦3起食源性霍乱暴发事件中所分离的28株菌株均为同一PFGE型，即P1型。证明它们来自同一传染源。而发生在2004年10月象山县丹东街道的1起食源性霍乱暴发的8株菌则均为P3型菌所引起，证明它们由另一传染源所引发。其他型别则为霍乱散发病例等所分离的菌株。这些PFGE分型结果证明，在霍乱的分子流行病学研究中，PFGE方法具有分辨力强，能为霍乱的溯源提供准确、可靠分子流行病学的证据。 （3）本项目使用RAPD（随机扩增多态性DNA分析技术）对52株O139群霍乱弧菌开展分型研究，结果52株菌株均出现7个清晰、明亮的条带，其分子量分别在350bp至1450bp之间，条带位置基本一致，据此可判断这些细菌为同一RAPD型别。我们的研究证明，PFGE分型方法的分辨力高于RAPD方法，但RAPD方法具有操作相对简便等特点。 （4）本项目开展了O139群霍乱弧菌耐药性及耐药基因的研究，发现本市这几年分离的O139霍乱弧菌耐药情况十分严重，大部分菌株出现多重耐药。并在国内首次报告在O139群霍乱弧菌检出β-内酰胺酶相关的耐药基因TEM-1，介导对氨苄西林和羧苄西林等的耐药。 （5）本项目对O139群霍乱弧菌CtxA毒力基因的核苷酸序列测定的研究，结果证明，52株O139群霍乱弧菌CtxA基因的核苷酸序列高度同源。序列的一致率为大于99.9﹪。 （6）本项目还开展了O139群霍乱弧菌1类整合子结构的研究。