近年来细胞移植疗法为心梗等心脏疾患提供了一条治疗新思路。但研究表明可供移植的供体细胞来源有限，因此，如何使各种干细胞有效转化为心肌细胞，成为国际研究的一个热点。各种干细胞向心肌分化的研究多集中在诱导剂和基因调控两方面的研究，心肌细胞发生是非常复杂的过程，它涉及多种转录因子如Nkx2-5、GATA4、MEF2C、Smads等的参与，尤其Nkx2-5在心肌发生中的作用研究受到热切关注。P19细胞是一种较为理想的用于研究心肌细胞分化和发育的工具细胞，在国际上广泛应用于心脏发育和心肌分化的研究。目前，国内关于转录因子Nkx2-5对心肌分化的影响和5-aza诱发的心肌发生事件中和Nkx2-5的调控关系几乎没有报道，因此本实验拟对该研究领域进行探讨。 　　故本研究就Nkx2-5是否确有心肌发生作用以及其心肌发生效率进行了研究，并试图探索一种P19细胞的单层培养模式，使其高效向心肌分化。国外许多研究表明Nkx2-5的表达对于胚胎心肌细胞的形成极为重要，作为调控心脏发育和心肌分化的重要转录因子之一，它调控启动子中含有NKE结合位点的心特异基因如ANP、心脏α-actin、CARP、myocardin和MEF2C等基因的适度表达，从而引起心肌发生。 　　针对Nkx2-5，本课题首次构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5，转入P19细胞，筛选出稳定表达Nkx2-5的P19细胞。P19Nkx2-5该细胞在聚集条件下，诱导了心肌标志物基因和蛋白水平的表达，发生向心肌分化，但是效率较低。后用5-aza诱导单层培养的P19细胞和P19Nkx2-5细胞，结果是前者在基因水平表达心肌早期转录因子和心肌特异基因。后者在基因和蛋白水平心肌标志物，Nkx2-5基因促进了的单层P19细胞在5-aza诱导时向心肌的分化。 　　本课题在基因调控和药物诱导两个方面对P19细胞的心肌分化情况进行了研究。针对同源框转录因子Nkx2-5转录调控心肌程序的作用和机制进行了探索。所有结果说明Nkx2-5基因有心肌发生作用，而且Nkx2-5基因可以促进诱导剂诱导的P19细胞单层培养时向心肌细胞的分化。有可能为心肌分化的研究提供P19细胞的单层培养模型，但是本实验的不足之处是实验中P19细胞向心肌分化的效率较低，为进一步提高实验中向心肌分化的效率，应筛选稳定高表达Nkx2-5基因的P19细胞系再进行转化效率检测。 　　本课题的研究结论填补我省在此方面研究的一项空白。

　　近年来细胞移植疗法为心梗等心脏疾患提供了一条治疗新思路。但研究表明可供移植的供体细胞来源有限，因此，如何使各种干细胞有效转化为心肌细胞，成为国际研究的一个热点。各种干细胞向心肌分化的研究多集中在诱导剂和基因调控两方面的研究，心肌细胞发生是非常复杂的过程，它涉及多种转录因子如Nkx2-5、GATA4、MEF2C、Smads等的参与，尤其Nkx2-5在心肌发生中的作用研究受到热切关注。P19细胞是一种较为理想的用于研究心肌细胞分化和发育的工具细胞，在国际上广泛应用于心脏发育和心肌分化的研究。目前，国内关于转录因子Nkx2-5对心肌分化的影响和5-aza诱发的心肌发生事件中和Nkx2-5的调控关系几乎没有报道，因此本实验拟对该研究领域进行探讨。 　　故本研究就Nkx2-5是否确有心肌发生作用以及其心肌发生效率进行了研究，并试图探索一种P19细胞的单层培养模式，使其高效向心肌分化。国外许多研究表明Nkx2-5的表达对于胚胎心肌细胞的形成极为重要，作为调控心脏发育和心肌分化的重要转录因子之一，它调控启动子中含有NKE结合位点的心特异基因如ANP、心脏α-actin、CARP、myocardin和MEF2C等基因的适度表达，从而引起心肌发生。 　　针对Nkx2-5，本课题首次构建真核表达质粒pEGFP-N1-Nkx2-5，转入P19细胞，筛选出稳定表达Nkx2-5的P19细胞。P19Nkx2-5该细胞在聚集条件下，诱导了心肌标志物基因和蛋白水平的表达，发生向心肌分化，但是效率较低。后用5-aza诱导单层培养的P19细胞和P19Nkx2-5细胞，结果是前者在基因水平表达心肌早期转录因子和心肌特异基因。后者在基因和蛋白水平心肌标志物，Nkx2-5基因促进了的单层P19细胞在5-aza诱导时向心肌的分化。 　　本课题在基因调控和药物诱导两个方面对P19细胞的心肌分化情况进行了研究。针对同源框转录因子Nkx2-5转录调控心肌程序的作用和机制进行了探索。所有结果说明Nkx2-5基因有心肌发生作用，而且Nkx2-5基因可以促进诱导剂诱导的P19细胞单层培养时向心肌细胞的分化。有可能为心肌分化的研究提供P19细胞的单层培养模型，但是本实验的不足之处是实验中P19细胞向心肌分化的效率较低，为进一步提高实验中向心肌分化的效率，应筛选稳定高表达Nkx2-5基因的P19细胞系再进行转化效率检测。 　　本课题的研究结论填补我省在此方面研究的一项空白。