一、 任务来源：
“抗SSB抗体检测在系统性红斑狼疮中的临床意义”的研究是唐山市工人医院承担的唐山市医药卫生2009年第一批指导计划课题，课题编号：09130219a。
该课题为探讨抗SSB抗体对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的敏感性和特异性，并了解其与SLE临床表现的关系。采用线型免疫印迹（LIA）法检测SLE患者与对照组血清抗SSB抗体，并记录SLE患者的主要临床表现，分析其与抗SSB抗体的关系。得出结论抗SSB抗体对SLE的诊断有重要意义，与颊部红斑、脱发、浆膜炎、sSS、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性和或抗SSA52抗体阳性有一定相关性。
二、技术原理及应用领域：
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE) 是一种全身性自身免疫病，本病的病理过程中除T细胞参与外，伴有多克隆的B淋巴细胞的活化。患者血清中可出现多种自身抗体，抗SSB抗体是SLE患者血清中常见的抗体之一，本文采用线型免疫（Line Immuno Assy,LIA）法检测SLE患者抗SSB抗体，并探讨了该项检查的临床意义。
抗SSB抗体是SLE患者血清中常见的自身抗体之一，也是较早产生的自身抗体之一。一项前瞻性的研究结果表明抗SSB抗体产生早于SLE症状出现和诊断，平均早于诊断确立3.61±0.38年，平均早于临床症状出现2.83±0.43年。症状出现前阳性率为34﹪，诊断前阳性率为34﹪。SLE确诊后阳性率为35﹪。提示抗SSB抗体是SLE发病过程的重要参与者，同时也提示抗SSB抗体在SLE病程中是比较稳定的自身抗体，本研究结果抗SSB抗体与SLEDAI无关支持了这一观点。本组患者SLE抗SSB抗体阳性率为25.7﹪，与前述差异较大。可能是由于检测方法不同所致。本研究表明在排除RA、pSS后抗SSB抗体对于诊断SLE仍具有较高的特异性达96.7﹪。因此，若患者抗SSB抗体阳性并排除了RA、pSS后应寻找诊断SLE的其它证据，一时不能诊断者应密切随访，以免漏诊，延误治疗。
临床上采用线型免疫（LIA）法检测SLE患者抗SSB抗体，与其它非类风湿关节炎(RA)非原发性干燥综合症(pSS)的其它风湿性疾病患者的血清SSB抗体比较，通过临床观察我们发现系统性红斑狼疮抗SSB抗体明显高于其它非类风湿关节炎(RA)非原发性干燥综合症(pSS)的其它风湿性疾病患者。临床上在排除RA、pSS后抗SSB抗体对于诊断SLE仍具有较高的特异性。因此，若患者抗SSB抗体阳性并排除了RA、pSS后应寻找诊断SLE的其它证据，一时不能诊断者应密切随访，在SLE的早期诊断和治疗上起到了很大的作用。
适宜在临床应大量广泛推广应用。
三、 课题目标完成情况：
1、选择我院门诊或住院新诊断SLE患者74例，全部符合1982年美国风湿病学会(ARA)SLE分类诊断标准且排除细菌感染。其中男3例，女71例，年龄12～78岁，平均(33.16±14.73)岁。选择同期非类风湿关节炎(Rheumatoid Athritis,RA)非原发性干燥综合症(primary Sjgren|s syndrome,pSS)的其它风湿性疾病患者30例作为对照组，其中强直性脊柱炎14例、多发性肌炎6例、皮肌炎3例、骨性关节炎3例、成人斯蒂尔病2例、硬皮病2例。
2、实验方法
抗SSB抗体检测，应用LIA法检测；红细胞（ RBC）计数、白细胞（WBC）计数、中性粒细胞（N）计数、淋巴细胞（L）计数、血小板（PLT）计数、ESR、CRP检查由我院检验科完成；ANA滴度采用间接免疫荧光法检测、抗ds-DNA抗体采用ELISA法检测。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体的检测同抗SSB抗体检测。
SLE病情活动性参照系统性红斑狼疮活动指数（观察项目：颊部红斑、盘状红斑、雷诺现象、关节炎、口腔溃疡、光过敏、脱发、浆膜炎（胸膜炎和或心包炎）、中枢神经受损、肾脏受损；继发性干燥综合征（second Sjgren|s syndrome,sSS）；RBC计数、WBC计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、PLT计数、ESR、CRP免疫球蛋白、补体；ANA滴度、抗ds-DNA抗体、抗SSA60抗体、抗SSA52抗体。
统计学处理 计数资料采用χ2检验或Fisher，s检验，计量资料采用t或t|检验。数据处理辅以SPSS11.0 软件包完成。
3、通过列表方式74例SLE患者血清中抗SSB抗体阳性率与30例对照组比较，抗SSB抗体阳性组和阴性组主要临床表现比较；抗SSB抗体阳性组和阴性组主要检查比较。结果74例SLE患者血清中25.7﹪抗SSB抗体阳性，30例对照组仅3.3﹪阳性，抗SSB抗体在SLE中检测的敏感性25.7﹪，排除类风湿关节炎（RA）和原发性干燥综合症（pSS）后抗SSB抗体在SLE中检测的特异性为96.7﹪。抗SSB抗体阳性组的SLE患者颊部红斑、脱发、浆膜炎、继发性干燥综合症（sSS）、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性、抗SSA52抗体阳性及两者均阳性的发生率显著高于抗SSB抗体阴性组 ( P均＜0.05)。
4、得出结论：抗SSB抗体对SLE的诊断有重要意义，与颊部红斑、脱发、浆膜炎、sSS、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性和或抗SSA52抗体阳性有一定相关性。
四、国内同类研究比较：
本课题探讨了抗SSB抗体对系统性红斑狼疮(SLE)诊断的敏感性和特异性，并了解其与SLE临床表现的关系。研究表明抗SSB抗体对SLE的诊断有重要意义，与颊部红斑、脱发、浆膜炎、sSS、周围血象减低、IgG升高、抗SSA60抗体阳性和或抗SSA52抗体阳性有一定相关性。在国内未见早于本课题的报道。
五、关键技术及创新点：
关键技术：
1、病例的筛选：选择我院门诊或住院新诊断SLE患者74例，全部符合1982年美国风湿病学会(ARA)SLE分类诊断标准且排除细菌感染。其中男3例，女71例，年龄12～78岁，平均(33.16±14.73)岁。选择同期非类风湿关节炎(Rheumatoid Athritis,RA)非原发性干燥综合症(primary Sjgren|s syndrome,pSS)的其它风湿性疾病患者30例作为对照组，其中强直性脊柱炎14例、多发性肌炎6例、皮肌炎3例、骨性关节炎3例、成人斯蒂尔病2例、硬皮病2例。
2、化验室及临床指标观察：
抗SSB抗体检测：抗SSB抗体检测试剂盒购自德国Imtec公司，应用LIA法检测患者血清中抗SSB抗体。重要步骤如下：反应槽中加入1孵育缓冲液湿润反应条，弃孵育缓冲液后，加入1﹕100稀释的血清1ml室温孵育1h ，冲洗3次后，加入1ml抗人IgG室温孵育30min，再冲洗3次后，加入1ml底物显色剂，室温孵育10min， 冲洗1次后，加入1ml终止液，室温孵育5min，滤纸干燥反应条后，与标准模板对照读取结果。
红细胞（ RBC）计数、白细胞（WBC）计数、中性粒细胞（N）计数、淋巴细胞（L）计数、血小板（PLT）计数、ESR、CRP检查由我院检验科完成；ANA滴度采用间接免疫荧光法检测、抗ds-DNA抗体采用ELISA法检测。抗SSA60抗体、抗SSA52抗体的检测同抗SSB抗体检测。
SLE病情活动性判参照系统性红斑狼疮活动指数（systemic lupus erythematosus disease active index,SLEDAI）
观察项目：颊部红斑、盘状红斑、雷诺现象、关节炎、口腔溃疡、光过敏、脱发、浆膜炎（胸膜炎和或心包炎）、中枢神经受损、肾脏受损；继发性干燥综合症（second Sjgren|s syndrome,sSS）；RBC计数、WBC计数、中性粒细胞计数、淋巴细胞计数、PLT计数、ESR、CRP免疫球蛋白、补体；ANA滴度、抗ds-DNA抗体、抗SSA60抗体、抗SSA52抗体。
统计学处理：计数资料采用χ2检验或Fisher，s检验，计量资料采用t或t|检验。数据处理辅以SPSS11.0 软件包完成。
创新点：本研究发现WBC、N计数降低与SSB抗体相关。一直认为N计数降低与抗多核中性粒细胞抗体（polymorphonuclear neutrophils,PMN）有关，但抗PMN抗体的本质不明。HSIEH等首次证实抗SSB抗体是抗PMN抗体的一种，同时研究认为抗SSB抗体不仅可以与PMN表面结合而且可以渗入PMN内，通过抗体依赖的细胞毒作用或活化诱导细胞死亡（activation-induced cell death,AICD）机制导致PMN吞噬功能下降和PMN凋亡加速。由于N占WBC的多数，因此WBC降低可能与抗SSB抗体有一定关系。约有8～30﹪SLE患并有sSS，原因不明。本研究发现抗SSB抗体阳性组和阴性组比较sSS发生率有统计学意义，sSS出现在抗SSB抗体阳性组高于SSB抗体阴性组。提示抗SSB抗体与sSS有关。本研究发现抗SSB抗体阳性组IgG免疫球蛋白显著升高，提示SLE患者有特异性分泌IgG型抗SSB抗体的B细胞克隆活化。
SSB分子和SSA60分子同属核糖核蛋白分子的不同片段，SSA52分子目前尚不能确定为核糖核蛋白分子的片段，可能与SSA60分子短暂结合。本研究表明抗SSB抗体常与抗SSA60抗体和或抗SSA52抗体同时出现。但其机制不明，有待于进一步研究。
六、实施效果及推广价值：
抗SSB抗体是SLE患者血清中常见的自身抗体之一，也是较早产生的自身抗体之一。
本课题采用线型免疫印迹（LIA）法检测SLE患者与对照组血清抗SSB抗体，并记录SLE患者的主要临床表现，分析其与抗SSB抗体的关系。通过临床观察我们发现系统性红斑狼疮抗SSB抗体明显高于其它非类风湿关节炎(RA)非原发性干燥综合症(pSS)的其它风湿性疾病患者。临床上在排除RA、pSS后抗SSB抗体对于诊断SLE仍具有较高的特异性。
因此，若患者抗SSB抗体阳性并排除了RA、pSS后应寻找诊断SLE的其它证据，一时不能诊断者应密切随访。本课题在SLE的早期诊断和治疗，避免漏诊，延误诊治上起到了很大的作用。在临床应大量广泛推广应用。
推广应用前景与措施
我院自本课题开展以来采用线型免疫（LIA）法检测SLE患者抗SSB抗体，在临床上与其它非类风湿关节炎(RA)非原发性干燥综合症(pSS)的其它风湿性疾病患者的血清SSB抗体比较，通过临床观察我们发现系统性红斑狼疮抗SSB抗体明显高于其它非类风湿关节炎(RA)非原发性干燥综合症(pSS)的其它风湿性疾病患者。临床上在排除RA、pSS后抗SSB抗体对于诊断SLE仍具有较高的特异性。因此，若患者抗SSB抗体阳性并排除了RA、pSS后应寻找诊断SLE的其它证据，一时不能诊断者应密切随访，在SLE的早期诊断和治疗上起到了很大的作用。可在临床上早期诊断治疗上大量广泛推广应用。
阶段性成果发表在：
1、《现代预防医学》2007年01期“抗SSB抗体检测在系统性红斑狼疮中的临床意义”；
2、《中国综合临床 》2009年06期“50例儿童系统性红斑狼疮的临床病症与免疫学特征研究”；
3、《临床合理用药杂志》2009年07月第13期“以心脏损害为首发表现的系统性红斑狼疮2例”；
4、《中西医结合研究》2009年6月第1卷第6期“系统性红斑狼疮患者D-二聚体和纤维蛋白原检测的临床应用价值”。 |
