霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，属于国际检疫传染病之一，也是我国法定管理的甲类传染病。由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期快速检测和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。作为口岸检验检疫部门，为了应对突发公共卫生事件的发生，建立快速检测霍乱弧菌诊断技术，提供准确、特异和高灵敏性的霍乱弧菌监测方法迫在眉睫。 本研究建立的用于霍乱弧菌筛检的实时荧光定量PCR方法，具有以下几项优点：1、快速简单：用荧光PCR仪只需1.5h即可得出检验结论；2、灵敏度高：由荧光PCR仪自动收集荧光信号，避免常规PCR终点分析法中的人为因素干扰，进一步提高了灵敏度，对霍乱弧菌检测其敏感性能够达到102 CFU /ml；3、特异性强：采用一对特异引物进行目标基因片段的扩增及一条可与模板互补配对的荧光探针进行检测，提高了特异性，从检测霍乱弧菌特异性溶解曲线看，O1群的溶解温度为82.4℃，O139群的溶解温度为80.4℃，有效地避免假阳性和假阴性；4、污染低：采用全封闭反应体系，PCR产物不用进行凝胶电泳，防止PCR产物污染，且具有较好的重复性。胶体金法O1群和O139群霍乱检测试剂盒最低检测出限结果为106 CFU/ml，达到临床最低检出量的要求，在15分钟内得到初步结果且不受非O1非O139群霍乱弧菌及其它肠道致病菌的干扰，无假阳性。二者作为快速检测方法对疾病预防和国境口岸传染病控制具有重要的应用价值。用建立的荧光定量PCR和胶体金法同时检测上海某区疾病预防控制中心收集的腹泻病患者的检材和水产品以及部分肠道门诊监测样品111份，结果全部为阴性，对中国疾病预防控制中心提供实验菌株作为盲样检测，结果为O1群检测阳性，O139群为阴性。 通过本课题研究，在出入境人群中引入荧光定量PCR和胶体金法检测霍乱弧菌，建立了适合一线检验检疫人员需要的霍乱疫情快速处置方案和实验室霍乱弧菌快速检测诊断方法，优化了霍乱检测程序，提高了实验室检测水平和口岸应急反应能力，为疫情快速诊断提供可靠保证。

霍乱是由霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，属于国际检疫传染病之一，也是我国法定管理的甲类传染病。由于霍乱流行迅速，且在流行期间发病率及死亡率均高，危害极大，因此早期快速检测和正确的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。作为口岸检验检疫部门，为了应对突发公共卫生事件的发生，建立快速检测霍乱弧菌诊断技术，提供准确、特异和高灵敏性的霍乱弧菌监测方法迫在眉睫。 本研究建立的用于霍乱弧菌筛检的实时荧光定量PCR方法，具有以下几项优点：1、快速简单：用荧光PCR仪只需1.5h即可得出检验结论；2、灵敏度高：由荧光PCR仪自动收集荧光信号，避免常规PCR终点分析法中的人为因素干扰，进一步提高了灵敏度，对霍乱弧菌检测其敏感性能够达到102 CFU /ml；3、特异性强：采用一对特异引物进行目标基因片段的扩增及一条可与模板互补配对的荧光探针进行检测，提高了特异性，从检测霍乱弧菌特异性溶解曲线看，O1群的溶解温度为82.4℃，O139群的溶解温度为80.4℃，有效地避免假阳性和假阴性；4、污染低：采用全封闭反应体系，PCR产物不用进行凝胶电泳，防止PCR产物污染，且具有较好的重复性。胶体金法O1群和O139群霍乱检测试剂盒最低检测出限结果为106 CFU/ml，达到临床最低检出量的要求，在15分钟内得到初步结果且不受非O1非O139群霍乱弧菌及其它肠道致病菌的干扰，无假阳性。二者作为快速检测方法对疾病预防和国境口岸传染病控制具有重要的应用价值。用建立的荧光定量PCR和胶体金法同时检测上海某区疾病预防控制中心收集的腹泻病患者的检材和水产品以及部分肠道门诊监测样品111份，结果全部为阴性，对中国疾病预防控制中心提供实验菌株作为盲样检测，结果为O1群检测阳性，O139群为阴性。 通过本课题研究，在出入境人群中引入荧光定量PCR和胶体金法检测霍乱弧菌，建立了适合一线检验检疫人员需要的霍乱疫情快速处置方案和实验室霍乱弧菌快速检测诊断方法，优化了霍乱检测程序，提高了实验室检测水平和口岸应急反应能力，为疫情快速诊断提供可靠保证。