1.技术说明： 1）建立糖尿病小鼠模型：用STZ腹腔注射，注射后3天，血糖≥16.7 mmol/L被认为糖尿病模型成功。糖尿病模型成功后继续饲养8周。 2）离体心脏缺血再灌注处理：心脏从胸腔取出后挂在Langendorff上稳定30分钟。所有的心脏都要经历常温下全心停灌。以TRPV1受体激动剂干预，比较其对糖尿病心脏和正常心脏心肌缺血保护的程度。同时用放免法测定灌流液及CGRP的含量。用Western blot测定糖尿病心脏和正常心脏心肌TRPV1受体的表达量。 3）构建重组腺病毒，采用分子克隆手段获得携带增强型绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组质粒、携带CGRP的重组质粒，以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-CGRP-GFP、Ad-GFP（对照），在293细胞内分别扩增，应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。 4）通过心肌注射重组腺病毒将含CGRP基因的腺病毒载体导入活体心脏，用放免法观察：CGRP基因的导入对心脏感觉神经末梢CGRP合成以及释放的影响。 5）CGRP基因的导入糖尿病小鼠后3天，在体和离体心脏缺血再灌注处理。通过对在体灌注后急性期梗死面积测定，心肌细胞活度测定等和离体的心功能测定，LDH的测定，观察其在心脏缺血再灌注损伤中心脏保护的改善作用。 2.应用前景： 1）本研究率先提出糖尿病与心肌缺血密切相关的机理之一为糖尿病神经末梢病变对TRPV1受体及神经递质CGRP的影响。结果显示CGRP有可能成为临床上一个新的心肌保护剂。并且通过对血清CGRP浓度的检测，可能有利于对心肌梗死患者预后作出评估，给临床综合评估提供一个准确的分子靶向检查。 2）本研究成功地将CGRP基因导入糖尿病小鼠的活体心脏，并起到很好的心脏保护作用，这为CGRP基因靶向导入在人体的应用提供了实验依据，使得CGRP的基因靶向导入治疗有可能在近期内成为对心肌缺血和糖尿病心肌病变的一种极其有希望的方法。可能提供一种新的改善糖尿病患者心肌缺血的手段，并为药物的开发提供一个新的作用点。

1.技术说明： 1）建立糖尿病小鼠模型：用STZ腹腔注射，注射后3天，血糖≥16.7 mmol/L被认为糖尿病模型成功。糖尿病模型成功后继续饲养8周。 2）离体心脏缺血再灌注处理：心脏从胸腔取出后挂在Langendorff上稳定30分钟。所有的心脏都要经历常温下全心停灌。以TRPV1受体激动剂干预，比较其对糖尿病心脏和正常心脏心肌缺血保护的程度。同时用放免法测定灌流液及CGRP的含量。用Western blot测定糖尿病心脏和正常心脏心肌TRPV1受体的表达量。 3）构建重组腺病毒，采用分子克隆手段获得携带增强型绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组质粒、携带CGRP的重组质粒，以细胞内同源重组法构建复制缺陷型重组腺病毒Ad-CGRP-GFP、Ad-GFP（对照），在293细胞内分别扩增，应用氯化铯密度梯度离心法纯化病毒。 4）通过心肌注射重组腺病毒将含CGRP基因的腺病毒载体导入活体心脏，用放免法观察：CGRP基因的导入对心脏感觉神经末梢CGRP合成以及释放的影响。 5）CGRP基因的导入糖尿病小鼠后3天，在体和离体心脏缺血再灌注处理。通过对在体灌注后急性期梗死面积测定，心肌细胞活度测定等和离体的心功能测定，LDH的测定，观察其在心脏缺血再灌注损伤中心脏保护的改善作用。 2.应用前景： 1）本研究率先提出糖尿病与心肌缺血密切相关的机理之一为糖尿病神经末梢病变对TRPV1受体及神经递质CGRP的影响。结果显示CGRP有可能成为临床上一个新的心肌保护剂。并且通过对血清CGRP浓度的检测，可能有利于对心肌梗死患者预后作出评估，给临床综合评估提供一个准确的分子靶向检查。 2）本研究成功地将CGRP基因导入糖尿病小鼠的活体心脏，并起到很好的心脏保护作用，这为CGRP基因靶向导入在人体的应用提供了实验依据，使得CGRP的基因靶向导入治疗有可能在近期内成为对心肌缺血和糖尿病心肌病变的一种极其有希望的方法。可能提供一种新的改善糖尿病患者心肌缺血的手段，并为药物的开发提供一个新的作用点。