简要技术说明： 　　本课题通过应用亚甲蓝/光化学法对血浆中病毒进行有效地灭活的方法，对2007年11月至2008年10月绍兴市无偿献血制备血浆，使用亚甲蓝/光化学法进行病毒灭活处理，并对处理前、加亚甲蓝后光照前、处理后的血浆样本进行了血浆成分的含量、凝血因子活性变化和病毒灭活效果、亚亚甲蓝残留量的检测，按课题既定指标明确了以下内容： 　　1）病毒灭活血浆的制备： 　　全血400ml制备的血浆使用无菌技术连接血浆袋和亚甲兰光照袋，将血浆溶入亚甲兰的血浆收集到光照袋后放入（4±2）℃医用病毒灭活箱（加入亚甲兰后含量为0.93～3.13mmol/L(1.28±0.30mmol/L)，经荧光(30000Lux) 照射35min后通过滤器过滤血浆。病毒灭活血浆与一般血浆一样应用于临床。 　　2）血浆灭活效果的评价： 　　对使用批次亚甲蓝成品耗材进行评价，方法为加入sindbis病毒和VSV病毒于血浆，测得灭活前后病毒滴度的变化非常显著，病毒降低量Ig TCID50≥4，病毒灭活效果理想。 　　3）对血浆主要成分进行下列成分测定： 　　总蛋白、白蛋白、Ⅷ因子、纤维蛋白原、免疫球蛋白测定，对抽样的血浆灭活前、加入亚甲蓝后光照前、光照后三组样本进行平行检测。作用过程中Ⅷ水平、总蛋白、白蛋白、IgA、IgG的含量基本保持稳定不变，纤维蛋白原、白蛋白和免疫球蛋白IgM在亚甲兰作用下发生变化，灭活后比灭活前有所损失，纤维蛋白原回收率维持可在87.4﹪±11.37﹪的水平， 其它各个成分的回收率都在98﹪以上，全部成分均达到了国家标准的要求。在亚甲蓝加入、光照、过滤过程中主要影响血浆成分变化的因素是亚甲蓝的加入，加入亚甲蓝后血浆成分的变化最明显，加亚甲蓝后光照前的血浆中ALB、Ⅷ和Fg含量低于光照处理并过滤后的成品血浆。 　　4）亚甲兰残留量残留量的测定使用液相层析法： 　　分别检测加入亚甲蓝后的血浆和灭活滤过后的血浆进行亚甲蓝含量测定，评定加入亚甲蓝浓度和最终血浆亚甲兰残留量。血浆灭活处理经滤过后亚甲兰残留量为0.07～0.62mmol/L(0.23±0.12mmol/L)，绝对残留量为0.014～0.146mmol(0.005±0.026mmol)，达到临床应用安全水平。 　5）使用1596份血浆计367230ml临床应用无不良反应和质量异常反馈结果。课题研究的在对病毒灭活血浆制备过程中，对制备前、加亚甲兰光照过滤前和过滤处理后的血浆成分，如纤维蛋白原和Ⅷ因子含量进行了比较和分析，加入亚甲兰后影响到纤维蛋白原和Ⅷ因子的活性，过滤去除亚甲兰后得以恢复；该研究内容在所检索的国内文献报道中未见报道。 　　应用前景： 　　亚甲兰/光化学病毒灭活血浆技术， 灭活机制明确、效果可靠、对人体安全，能够起到杀灭血浆中未检测病毒和弥补检测窗口期的作用，而且对血浆主要成分的影响不大，仍能够确保血浆有效成分的应用效果，它的应用可大大提高输用血浆的安全性，为防止输血传染病发生提供了最后一道防线。 病毒灭活血浆的适应症与普通冰冻血浆相同，特别是对于反复多次输血和血浆置换治疗的患者，能有效的降低感染病毒的机会，临床还可从充分利用病毒灭活血浆开展治疗，用自体或异体血浆置换的方法，将病毒灭活后的血浆输注，治疗乙型慢性活动性肝炎等。

　　简要技术说明： 　　本课题通过应用亚甲蓝/光化学法对血浆中病毒进行有效地灭活的方法，对2007年11月至2008年10月绍兴市无偿献血制备血浆，使用亚甲蓝/光化学法进行病毒灭活处理，并对处理前、加亚甲蓝后光照前、处理后的血浆样本进行了血浆成分的含量、凝血因子活性变化和病毒灭活效果、亚亚甲蓝残留量的检测，按课题既定指标明确了以下内容： 　　1）病毒灭活血浆的制备： 　　全血400ml制备的血浆使用无菌技术连接血浆袋和亚甲兰光照袋，将血浆溶入亚甲兰的血浆收集到光照袋后放入（4±2）℃医用病毒灭活箱（加入亚甲兰后含量为0.93～3.13mmol/L(1.28±0.30mmol/L)，经荧光(30000Lux) 照射35min后通过滤器过滤血浆。病毒灭活血浆与一般血浆一样应用于临床。 　　2）血浆灭活效果的评价： 　　对使用批次亚甲蓝成品耗材进行评价，方法为加入sindbis病毒和VSV病毒于血浆，测得灭活前后病毒滴度的变化非常显著，病毒降低量Ig TCID50≥4，病毒灭活效果理想。 　　3）对血浆主要成分进行下列成分测定： 　　总蛋白、白蛋白、Ⅷ因子、纤维蛋白原、免疫球蛋白测定，对抽样的血浆灭活前、加入亚甲蓝后光照前、光照后三组样本进行平行检测。作用过程中Ⅷ水平、总蛋白、白蛋白、IgA、IgG的含量基本保持稳定不变，纤维蛋白原、白蛋白和免疫球蛋白IgM在亚甲兰作用下发生变化，灭活后比灭活前有所损失，纤维蛋白原回收率维持可在87.4﹪±11.37﹪的水平， 其它各个成分的回收率都在98﹪以上，全部成分均达到了国家标准的要求。在亚甲蓝加入、光照、过滤过程中主要影响血浆成分变化的因素是亚甲蓝的加入，加入亚甲蓝后血浆成分的变化最明显，加亚甲蓝后光照前的血浆中ALB、Ⅷ和Fg含量低于光照处理并过滤后的成品血浆。 　　4）亚甲兰残留量残留量的测定使用液相层析法： 　　分别检测加入亚甲蓝后的血浆和灭活滤过后的血浆进行亚甲蓝含量测定，评定加入亚甲蓝浓度和最终血浆亚甲兰残留量。血浆灭活处理经滤过后亚甲兰残留量为0.07～0.62mmol/L(0.23±0.12mmol/L)，绝对残留量为0.014～0.146mmol(0.005±0.026mmol)，达到临床应用安全水平。 　5）使用1596份血浆计367230ml临床应用无不良反应和质量异常反馈结果。课题研究的在对病毒灭活血浆制备过程中，对制备前、加亚甲兰光照过滤前和过滤处理后的血浆成分，如纤维蛋白原和Ⅷ因子含量进行了比较和分析，加入亚甲兰后影响到纤维蛋白原和Ⅷ因子的活性，过滤去除亚甲兰后得以恢复；该研究内容在所检索的国内文献报道中未见报道。 　　应用前景： 　　亚甲兰/光化学病毒灭活血浆技术， 灭活机制明确、效果可靠、对人体安全，能够起到杀灭血浆中未检测病毒和弥补检测窗口期的作用，而且对血浆主要成分的影响不大，仍能够确保血浆有效成分的应用效果，它的应用可大大提高输用血浆的安全性，为防止输血传染病发生提供了最后一道防线。 病毒灭活血浆的适应症与普通冰冻血浆相同，特别是对于反复多次输血和血浆置换治疗的患者，能有效的降低感染病毒的机会，临床还可从充分利用病毒灭活血浆开展治疗，用自体或异体血浆置换的方法，将病毒灭活后的血浆输注，治疗乙型慢性活动性肝炎等。