简要技术说明： 　　本项目为绍兴市科技计划项目，编号为2007A33004。 　　项目学科领域为基础医学范畴。 　　本项目主要采用分子生物学技术中的随机扩增多态性DNA(RAPD)和PCR技术，对绍兴地区近两年散发的甲型副伤寒沙门菌进行同源性分析及gyrA基因突变与喹诺酮类耐药关系的研究。 　　本项目完成了计划项目合同书规定的各项内容： 　　⑴ 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法，NTSYSpc-2.10e软件进行聚类分析，甲型副伤寒沙门氏菌株进行基因分型，探讨了本地区近年流行的甲副菌株的亲缘关系。 　　⑵ 采用K-B法，对收集的菌株进行青霉素类，头孢类，氨基糖甙类，喹诺酮类和其它临床常用的二十一种抗生素进行体外药敏测定，受检菌株对大多数抗生素表现较高的敏感性，且未发现多重耐药菌株，为防止耐药菌株的出现，临床上应合理选择抗生素。 　　⑶ 对所有受检菌株进行质粒提取试验，未检测到含有质粒的菌株，药敏试验结果表明菌株除对第一代喹诺酮呈100﹪耐药外，对其它各类抗生素高度敏感。试验发现萘啶酸的耐药与gyrA基因83位或87位氨基酸的突变有关，而该基因位于染色体DNA，其耐药性应主要通过垂直传播。 　　与国内外同类技术的比较： 　　⑴ 随机扩增多态性DNA(RAPD) 分子分型研究： 　　目前国内外有相关报道，采用该法对细菌进行亲缘关系分析，而专门针对甲型副伤寒沙门菌进行分型的报道相对较少，对电泳图谱用NTSYSpc-2.10e软件进行聚类分析，对绍兴地区近年散发的甲型副伤寒沙门氏菌株进行基因分型，并探讨了不同分离株间的亲缘关系。 　　⑵ gyrA基因突变研究： 　　利用PCR、测序和序列比对分析gyrA基因突变，绍兴地区甲型副伤寒沙门菌对萘啶酸耐药与gyrA基因83位或87位氨基酸的突变有直接关系，且83位点发生C→T即TCC→TTC（Ser→Phe）的突变、87位点发生A→G即GAC→GGC（Asp→Gly）的突变，这与报道基本一致。83位或87位发生突变的频率与报道不尽相同，而绍兴地区主要为83位Ser→Phe的突变即52株受检菌株中有51株发生83位突变，仅1株87位突变。通过对gyrA基因突变研究，探讨了绍兴地区甲型副伤寒沙门氏菌株对喹诺酮类的耐药机制。 　　通过本研究深入了解了绍兴地区近年散发的不同来源菌株的亲缘关系与喹诺酮的耐药机理，揭示表型的分子机制，为临床指导用药、时效控制疫情、研发科学防治措施提供了理论依据，达到有效降低病人治疗费用、时效控制疫情、研发科学防治措施的目的，从而保障人民健康，促进地区经济发展，具有十分重要的意义。 应用前景： 　　本研究发现所有受试甲型副伤寒沙门菌株在83或87位发生了单个突变，且主要为83位的突变，这一结果为绍兴地区近两年来流行甲型副伤寒沙门菌对萘啶酸耐药而环丙沙星敏感做了很好的诠释。本试验结果说明RAPD（随机扩增多态性）方法可以用来检测医院感染菌株或者流行病菌株的分型，以利于及时了解本地区或本单位的医院感染或者流行菌株的情况。本研究成果为甲型副伤寒患者的治疗药物选择，相关部门进行副甲流行病学调查、追踪传染源、预测流行趋势、制定预防措施、时效控制疫情及研发科学防治措施提供一定的理论依据。 　　本研究已完成研究论文2篇，已投稿待发表，进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加学术交流会2次以上。

　　简要技术说明： 　　本项目为绍兴市科技计划项目，编号为2007A33004。 　　项目学科领域为基础医学范畴。 　　本项目主要采用分子生物学技术中的随机扩增多态性DNA(RAPD)和PCR技术，对绍兴地区近两年散发的甲型副伤寒沙门菌进行同源性分析及gyrA基因突变与喹诺酮类耐药关系的研究。 　　本项目完成了计划项目合同书规定的各项内容： 　　⑴ 采用随机扩增多态性DNA(RAPD)方法，NTSYSpc-2.10e软件进行聚类分析，甲型副伤寒沙门氏菌株进行基因分型，探讨了本地区近年流行的甲副菌株的亲缘关系。 　　⑵ 采用K-B法，对收集的菌株进行青霉素类，头孢类，氨基糖甙类，喹诺酮类和其它临床常用的二十一种抗生素进行体外药敏测定，受检菌株对大多数抗生素表现较高的敏感性，且未发现多重耐药菌株，为防止耐药菌株的出现，临床上应合理选择抗生素。 　　⑶ 对所有受检菌株进行质粒提取试验，未检测到含有质粒的菌株，药敏试验结果表明菌株除对第一代喹诺酮呈100﹪耐药外，对其它各类抗生素高度敏感。试验发现萘啶酸的耐药与gyrA基因83位或87位氨基酸的突变有关，而该基因位于染色体DNA，其耐药性应主要通过垂直传播。 　　与国内外同类技术的比较： 　　⑴ 随机扩增多态性DNA(RAPD) 分子分型研究： 　　目前国内外有相关报道，采用该法对细菌进行亲缘关系分析，而专门针对甲型副伤寒沙门菌进行分型的报道相对较少，对电泳图谱用NTSYSpc-2.10e软件进行聚类分析，对绍兴地区近年散发的甲型副伤寒沙门氏菌株进行基因分型，并探讨了不同分离株间的亲缘关系。 　　⑵ gyrA基因突变研究： 　　利用PCR、测序和序列比对分析gyrA基因突变，绍兴地区甲型副伤寒沙门菌对萘啶酸耐药与gyrA基因83位或87位氨基酸的突变有直接关系，且83位点发生C→T即TCC→TTC（Ser→Phe）的突变、87位点发生A→G即GAC→GGC（Asp→Gly）的突变，这与报道基本一致。83位或87位发生突变的频率与报道不尽相同，而绍兴地区主要为83位Ser→Phe的突变即52株受检菌株中有51株发生83位突变，仅1株87位突变。通过对gyrA基因突变研究，探讨了绍兴地区甲型副伤寒沙门氏菌株对喹诺酮类的耐药机制。 　　通过本研究深入了解了绍兴地区近年散发的不同来源菌株的亲缘关系与喹诺酮的耐药机理，揭示表型的分子机制，为临床指导用药、时效控制疫情、研发科学防治措施提供了理论依据，达到有效降低病人治疗费用、时效控制疫情、研发科学防治措施的目的，从而保障人民健康，促进地区经济发展，具有十分重要的意义。 应用前景： 　　本研究发现所有受试甲型副伤寒沙门菌株在83或87位发生了单个突变，且主要为83位的突变，这一结果为绍兴地区近两年来流行甲型副伤寒沙门菌对萘啶酸耐药而环丙沙星敏感做了很好的诠释。本试验结果说明RAPD（随机扩增多态性）方法可以用来检测医院感染菌株或者流行病菌株的分型，以利于及时了解本地区或本单位的医院感染或者流行菌株的情况。本研究成果为甲型副伤寒患者的治疗药物选择，相关部门进行副甲流行病学调查、追踪传染源、预测流行趋势、制定预防措施、时效控制疫情及研发科学防治措施提供一定的理论依据。 　　本研究已完成研究论文2篇，已投稿待发表，进一步的推广应用措施有： 　　1、申报科研成果奖。 　　2、申报省医药成果重点推广项目，并作推广。 　　3、申报以该内容为主的省级或市级继续教育项目。 　　4、参加学术交流会2次以上。