1. 建立了Real-time PCR 技术用于检测GADD45基因表达，重复性良好。 采用SYBR实时荧光PCR方法扩增，每个样品的GAPDH和GADD45基因分管同板相同条件扩增，PCR反应结束后进行融解曲线分析，排除了非特异性PCR产物的污染。并各取PCR产物进行3% 琼脂糖凝胶(含0.5% EB)电泳，采用Doc1000凝胶成像系统采集图像，结果产物为单一条带，排除了非特异性PCR产物的污染。做平行试验，重复性良好。 2. 明确了人外周血淋巴细胞受辐射诱导后，GADD45基因表达变化存在剂量—效应关系。 人外周血淋巴细胞受照后，GADD45基因mRNA表达上调，各剂量组GADD45基因表达均显著高于对照组(p＜0．001)，在l-4Gy剂量范围内，GADD45基因表达随着照射剂量的增加而上升，4Gy照射时达到峰值，8Gy表达不再有明显的增加，但仍然保持在较高水平。应用Real-time PCR 技术检测GADD45基因表达，存在量-效关系。用SPSS10.0统计学软件进行单因素方差分析和回归分析，其线性回归方程为： =3.408+1.528x, R2=0.787。 表 GADD45 基因表达的剂量-效应变化 Irradiation dose (Gy) △△CT RQ▲ 0.0 -0.00±0.11 1.00 0.5 -1.12±0.03 2.22 1.0 -2.34±0.10 5.34 2.0 -3.14±0.13 9.12 4.0 -3.73±0.12 13.32 8.0 -3.71±0.15 13.14 ▲ RQ=2-△△CT ，n=3 3. 明确了人外周血淋巴细胞受辐射诱导后，GADD45基因表达变化时间—效应的响应范围。 在时间—效应方面，我们观察到GADD45基因表达水平在2Gy X射线照射后到72 h内，显著高于对照组，形成了一个照射后的表达高峰，其中最高点在照射后4 h，这与Tusher 等和傅春玲等报道的受照后4 h达到峰值的研究结果相对应。 主要创新点，获得的经济、社会效益，对学科建设推动作用： 本实验我们采用的是实时荧光定量PCR方法，该方法具有高灵敏度、高重现性，定量准确、误差小、全封闭检测、易于标准化等优点；而且不受标本量限制，适合对大人群检测，结合提取人外周血淋巴细胞的取材方式，容易为公众接受；同时该技术是一种定量PCR，可以对样品中单个拷贝基因进行定量，保证了相关结果的可重复性。我们利用实时荧光定量PCR技术检测电离辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因的表达变化，发现GADD45基因表达在一定剂量范围内存在剂量—效应关系，因此该技术有可能成为一个新的辐射生物剂量计。可以尽早、尽快地运用于剂量估算，对于放射损伤的诊断、医护监督、合理救治和事故处理等至关重要。此外，也可以运用于核医学和放射医学的放射诊治、放射敏感性监测、诊治方案的制订和效果的评价及危害的判断。

1. 建立了Real-time PCR 技术用于检测GADD45基因表达，重复性良好。 采用SYBR实时荧光PCR方法扩增，每个样品的GAPDH和GADD45基因分管同板相同条件扩增，PCR反应结束后进行融解曲线分析，排除了非特异性PCR产物的污染。并各取PCR产物进行3% 琼脂糖凝胶(含0.5% EB)电泳，采用Doc1000凝胶成像系统采集图像，结果产物为单一条带，排除了非特异性PCR产物的污染。做平行试验，重复性良好。 2. 明确了人外周血淋巴细胞受辐射诱导后，GADD45基因表达变化存在剂量—效应关系。 人外周血淋巴细胞受照后，GADD45基因mRNA表达上调，各剂量组GADD45基因表达均显著高于对照组(p＜0．001)，在l-4Gy剂量范围内，GADD45基因表达随着照射剂量的增加而上升，4Gy照射时达到峰值，8Gy表达不再有明显的增加，但仍然保持在较高水平。应用Real-time PCR 技术检测GADD45基因表达，存在量-效关系。用SPSS10.0统计学软件进行单因素方差分析和回归分析，其线性回归方程为： =3.408+1.528x, R2=0.787。 表 GADD45 基因表达的剂量-效应变化 Irradiation dose (Gy) △△CT RQ▲ 0.0 -0.00±0.11 1.00 0.5 -1.12±0.03 2.22 1.0 -2.34±0.10 5.34 2.0 -3.14±0.13 9.12 4.0 -3.73±0.12 13.32 8.0 -3.71±0.15 13.14 ▲ RQ=2-△△CT ，n=3 3. 明确了人外周血淋巴细胞受辐射诱导后，GADD45基因表达变化时间—效应的响应范围。 在时间—效应方面，我们观察到GADD45基因表达水平在2Gy X射线照射后到72 h内，显著高于对照组，形成了一个照射后的表达高峰，其中最高点在照射后4 h，这与Tusher 等和傅春玲等报道的受照后4 h达到峰值的研究结果相对应。 主要创新点，获得的经济、社会效益，对学科建设推动作用： 本实验我们采用的是实时荧光定量PCR方法，该方法具有高灵敏度、高重现性，定量准确、误差小、全封闭检测、易于标准化等优点；而且不受标本量限制，适合对大人群检测，结合提取人外周血淋巴细胞的取材方式，容易为公众接受；同时该技术是一种定量PCR，可以对样品中单个拷贝基因进行定量，保证了相关结果的可重复性。我们利用实时荧光定量PCR技术检测电离辐射诱导人淋巴细胞GADD45基因的表达变化，发现GADD45基因表达在一定剂量范围内存在剂量—效应关系，因此该技术有可能成为一个新的辐射生物剂量计。可以尽早、尽快地运用于剂量估算，对于放射损伤的诊断、医护监督、合理救治和事故处理等至关重要。此外，也可以运用于核医学和放射医学的放射诊治、放射敏感性监测、诊治方案的制订和效果的评价及危害的判断。