本课题通过分离、纯化和培养Wistar大鼠的胰岛β细胞，采用双硫腙(DTZ)染色检测胰岛β细胞获得率，台盼蓝染色检测胰岛β细胞的存活活力，放射免疫法检测胰岛β细胞的生物学活性；分别培养链脲菌素(STZ)、四氧嘧啶(ALX)、过氧化氢(H2O2)组及各组＋不同浓度的内吗啡肽(Ems)组培养胰岛β细胞，MTT比色法测定胰岛β细胞的存活率，研究了STZ、ALX、H2O2对胰岛β细胞功能的损伤及Ems对这种损伤所起的作用。分别鉴定了胰岛β细胞的功能，EM1和EM2对离体胰岛β细胞的功能影响。 细胞存活率测定：MTT（四唑蓝）分析EM1、EM2对STZ、ALX、H2O2损伤胰岛β细胞的影响，采用放射免疫法测定胰岛素释放量，EM2对由ALX诱导胰岛β细胞损伤的保护作用，透射电镜观察ALX诱导的细胞凋亡，DNA片段化检测内吗啡肽对ALX损伤后DNA的修复，TUNEL法检测细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡。结果发现STZ、ALX、H2O2对胰岛β细胞有剂量依赖的毒性作用；内吗啡肽1与内吗啡肽2能够保护STZ、ALX和H2O2诱导损伤的胰岛β细胞的存活率，且其保护作用没有呈现浓度依赖性；内吗啡肽能够保护胰岛β细胞的分泌功能。表明内吗啡肽能够抑制STZ、ALX、H2O2诱导的对胰岛β细胞的损伤性作用，对暴露于高糖环境的血管内皮及胰岛β细胞具有一定的保护作用，而且这种作用很可能是通过由阿片受体介导、通过NO-cGMP途径实现的；我们推测内吗啡肽在对抗胰岛β细胞的氧化损伤中起到了一定的作用。通过孵育对照组、高糖组及高糖加不同浓度的Ems组、高糖加Ems加纳络酮组日本白兔腹主动脉环6小时后，分别测定各组乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应性以及环磷酸鸟苷含量的变化。研究了高糖环境对血管内皮功能的损伤及Ems对这种损伤所起的作用。结果发现高糖使乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应性减弱，环磷酸鸟苷含量降低；Ems可以使高糖作用下内皮依赖性舒张反应性增强，环磷酸鸟苷含量升高；纳络酮能够拮抗内吗啡肽对主动脉环内皮细胞的保护作用。EM1和EM2产生了相同的实验效应。结果表明Ems对高糖环境下内皮功能的损伤具有保护作用，并且这种作用可能主要是通过特异性激活μ阿片受体起作用的。通过建立由四氧嘧啶诱导的雄性Wistar糖尿病大鼠模型，测定平均动脉压、心率及行双侧迷走神经切除术，研究了内吗啡肽对非糖尿病和糖尿病大鼠心血管系统的影响。结果发现四氧嘧啶诱导4～5周以后，静脉注射内吗啡肽能剂量依赖的，持久的升高糖尿病大鼠的系统血压，并使心率加快。腹腔注射纳络酮可完全抑制血压升高的效应。同时，双侧迷走神经切除能有部分减弱血压升高，心率加快的生理效应。四氧嘧啶诱导6～10周以后，静脉注射内吗啡肽诱导了非剂量依赖的各种不同的血压变化：血压降低，血压升高，或是先降低后升高的双相变化，或者是没有任何变化。EM1产生的心血管效应与EM2相同。结果表明，四氧嘧啶诱导4～5周的糖尿病大鼠静脉注射Ems后血压升高，心率加快可能是由于迷走神经的变化，并可能是通过对纳络酮敏感的一条生理途径起作用；四氧嘧啶诱导6～10周的糖尿病大鼠静脉注射Ems后血压紊乱，可能是随着糖尿病病程延长引起了Ems心血管反馈系统功能的紊乱，内源性的阿片肽EMI和EM2对心血管功能损伤有保护作用，这有可能为胰岛β细胞的氧化应激反应提供了新的理解，同时为临床上糖尿病的防治过程中保护胰岛β细胞的功能提供了新思路。

本课题通过分离、纯化和培养Wistar大鼠的胰岛β细胞，采用双硫腙(DTZ)染色检测胰岛β细胞获得率，台盼蓝染色检测胰岛β细胞的存活活力，放射免疫法检测胰岛β细胞的生物学活性；分别培养链脲菌素(STZ)、四氧嘧啶(ALX)、过氧化氢(H2O2)组及各组＋不同浓度的内吗啡肽(Ems)组培养胰岛β细胞，MTT比色法测定胰岛β细胞的存活率，研究了STZ、ALX、H2O2对胰岛β细胞功能的损伤及Ems对这种损伤所起的作用。分别鉴定了胰岛β细胞的功能，EM1和EM2对离体胰岛β细胞的功能影响。 细胞存活率测定：MTT（四唑蓝）分析EM1、EM2对STZ、ALX、H2O2损伤胰岛β细胞的影响，采用放射免疫法测定胰岛素释放量，EM2对由ALX诱导胰岛β细胞损伤的保护作用，透射电镜观察ALX诱导的细胞凋亡，DNA片段化检测内吗啡肽对ALX损伤后DNA的修复，TUNEL法检测细胞凋亡，流式细胞术检测细胞凋亡。结果发现STZ、ALX、H2O2对胰岛β细胞有剂量依赖的毒性作用；内吗啡肽1与内吗啡肽2能够保护STZ、ALX和H2O2诱导损伤的胰岛β细胞的存活率，且其保护作用没有呈现浓度依赖性；内吗啡肽能够保护胰岛β细胞的分泌功能。表明内吗啡肽能够抑制STZ、ALX、H2O2诱导的对胰岛β细胞的损伤性作用，对暴露于高糖环境的血管内皮及胰岛β细胞具有一定的保护作用，而且这种作用很可能是通过由阿片受体介导、通过NO-cGMP途径实现的；我们推测内吗啡肽在对抗胰岛β细胞的氧化损伤中起到了一定的作用。通过孵育对照组、高糖组及高糖加不同浓度的Ems组、高糖加Ems加纳络酮组日本白兔腹主动脉环6小时后，分别测定各组乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应性以及环磷酸鸟苷含量的变化。研究了高糖环境对血管内皮功能的损伤及Ems对这种损伤所起的作用。结果发现高糖使乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应性减弱，环磷酸鸟苷含量降低；Ems可以使高糖作用下内皮依赖性舒张反应性增强，环磷酸鸟苷含量升高；纳络酮能够拮抗内吗啡肽对主动脉环内皮细胞的保护作用。EM1和EM2产生了相同的实验效应。结果表明Ems对高糖环境下内皮功能的损伤具有保护作用，并且这种作用可能主要是通过特异性激活μ阿片受体起作用的。通过建立由四氧嘧啶诱导的雄性Wistar糖尿病大鼠模型，测定平均动脉压、心率及行双侧迷走神经切除术，研究了内吗啡肽对非糖尿病和糖尿病大鼠心血管系统的影响。结果发现四氧嘧啶诱导4～5周以后，静脉注射内吗啡肽能剂量依赖的，持久的升高糖尿病大鼠的系统血压，并使心率加快。腹腔注射纳络酮可完全抑制血压升高的效应。同时，双侧迷走神经切除能有部分减弱血压升高，心率加快的生理效应。四氧嘧啶诱导6～10周以后，静脉注射内吗啡肽诱导了非剂量依赖的各种不同的血压变化：血压降低，血压升高，或是先降低后升高的双相变化，或者是没有任何变化。EM1产生的心血管效应与EM2相同。结果表明，四氧嘧啶诱导4～5周的糖尿病大鼠静脉注射Ems后血压升高，心率加快可能是由于迷走神经的变化，并可能是通过对纳络酮敏感的一条生理途径起作用；四氧嘧啶诱导6～10周的糖尿病大鼠静脉注射Ems后血压紊乱，可能是随着糖尿病病程延长引起了Ems心血管反馈系统功能的紊乱，内源性的阿片肽EMI和EM2对心血管功能损伤有保护作用，这有可能为胰岛β细胞的氧化应激反应提供了新的理解，同时为临床上糖尿病的防治过程中保护胰岛β细胞的功能提供了新思路。