本项目为自选课题，采用基因工程重组技术，从人外周血中提取总RNA，RT-PCR扩增cDNA第1链合成，以cDNA为模板，PCR扩增人sCR1分子胞外区基因，用pET28a原核表达载体和pPIC9K真核表达载体构建人sCR1分子胞外区。经连接、转化后，进行电泳、单、双酶切及PCR扩增目的片断进行测序分析。 　　测序结果与GenBank登录的人sCR1分子胞外区基因片段完全一致，成功构建了pET28a-sCR1表达载体和pPIC9K-sCR1表达载体，分别在E.coli BL21（DE3）中表达人sCR1融合蛋白和在酵母细胞SMD1168中表达人sCR1融合蛋白，建立了一种大量表达sCR1蛋白方式和较为接近人体天然sCR1蛋白表达方式，表达的sCR1融合蛋白经纯化后，获得了具有免疫原性和抑制补体活性功能的人sCR1融合蛋白。 　　我们将原核表达的人sCR1融合蛋白和真核表达的人sCR1融合蛋白作为免疫原，分别免疫家兔后，制备出原核表达人sCR1融合蛋白的高效价兔抗人sCR1融合蛋白特异性多克隆抗体和真核表达人sCR1融合蛋白的高效价兔抗人sCR1融合蛋白特异性多克隆抗体，为建立敏感、特异的免疫学检测诊断提供了可靠的实验方法和临床治疗提供了基础。 　　1、首次采用了酵母SMD1168细胞pPIC9K载体和原核pET28a载体构建人sCR1分子胞外区基因，已成功构建了pPIC9K-sCR1表达载体和pET28a-sCR1表达载体。 　　2、构建的酵母表达载体pPIC9K-sCR1表达载体，利用蛋白酶缺陷型菌株SMD1168表达人sCR1融合蛋白。该菌株属真核表达系统，具有一定的蛋白质翻译后加工，有利于真核蛋白的表达，建立了一种较为接近人体天然蛋白表达方式。 　　3、构建的原核pET28a-sCR1表达，采用E.coli BL21（DE3）表达人sCR1融合蛋白，培养简单、迅速、经济而又适合大规模生产，可诱导产生大量sCR1融合蛋白，在短期内纯化和使用表达蛋白，建立了大量表达人sCR1融合蛋白方式。 　　4、获得到高拷贝整合的重组酵母细胞克隆菌株及原核细胞高效表达克隆菌株，分别经甲醇及IPTG诱导后，可高效表达出重组人sCR1融合蛋白，经SDS-PAGE及Western blot均证实人sCR1基因编码的蛋白表达，并用亲和层析纯化后，得到较纯的、具有免疫原性和抑制补体活性功能的人sCR1融合蛋白。 　　5、体外采用CH50法作为终点指标进行定量证实，表达人sCR1分子胞外区基因融合蛋白有明显抑制补体活性的功能。 　　6、我们将原核表达的人sCR1融合蛋白和真核表达的人sCR1融合蛋白作为免疫原，分别免疫家兔后，制备出两种高效价兔抗人sCR1融合蛋白的特异性多克隆抗体，为建立敏感、特异的免疫学检测提供了可靠的实验方法。 　　7、重组人sCR1是CR1的胞外片段，属于人体自身成分，在治疗中不易引起免疫应答，因而安全性好，保留了CR1抑制补体活性的结构和功能，可作为一种内源性的补体调节蛋白治疗剂，用于阻断人类疾病时补体的不适当激活而造成的组织损伤，如自身免疫性疾病、炎症损伤、器官移植术后等方面的临床免疫学检测和治疗奠定了基础。

　　本项目为自选课题，采用基因工程重组技术，从人外周血中提取总RNA，RT-PCR扩增cDNA第1链合成，以cDNA为模板，PCR扩增人sCR1分子胞外区基因，用pET28a原核表达载体和pPIC9K真核表达载体构建人sCR1分子胞外区。经连接、转化后，进行电泳、单、双酶切及PCR扩增目的片断进行测序分析。 　　测序结果与GenBank登录的人sCR1分子胞外区基因片段完全一致，成功构建了pET28a-sCR1表达载体和pPIC9K-sCR1表达载体，分别在E.coli BL21（DE3）中表达人sCR1融合蛋白和在酵母细胞SMD1168中表达人sCR1融合蛋白，建立了一种大量表达sCR1蛋白方式和较为接近人体天然sCR1蛋白表达方式，表达的sCR1融合蛋白经纯化后，获得了具有免疫原性和抑制补体活性功能的人sCR1融合蛋白。 　　我们将原核表达的人sCR1融合蛋白和真核表达的人sCR1融合蛋白作为免疫原，分别免疫家兔后，制备出原核表达人sCR1融合蛋白的高效价兔抗人sCR1融合蛋白特异性多克隆抗体和真核表达人sCR1融合蛋白的高效价兔抗人sCR1融合蛋白特异性多克隆抗体，为建立敏感、特异的免疫学检测诊断提供了可靠的实验方法和临床治疗提供了基础。 　　1、首次采用了酵母SMD1168细胞pPIC9K载体和原核pET28a载体构建人sCR1分子胞外区基因，已成功构建了pPIC9K-sCR1表达载体和pET28a-sCR1表达载体。 　　2、构建的酵母表达载体pPIC9K-sCR1表达载体，利用蛋白酶缺陷型菌株SMD1168表达人sCR1融合蛋白。该菌株属真核表达系统，具有一定的蛋白质翻译后加工，有利于真核蛋白的表达，建立了一种较为接近人体天然蛋白表达方式。 　　3、构建的原核pET28a-sCR1表达，采用E.coli BL21（DE3）表达人sCR1融合蛋白，培养简单、迅速、经济而又适合大规模生产，可诱导产生大量sCR1融合蛋白，在短期内纯化和使用表达蛋白，建立了大量表达人sCR1融合蛋白方式。 　　4、获得到高拷贝整合的重组酵母细胞克隆菌株及原核细胞高效表达克隆菌株，分别经甲醇及IPTG诱导后，可高效表达出重组人sCR1融合蛋白，经SDS-PAGE及Western blot均证实人sCR1基因编码的蛋白表达，并用亲和层析纯化后，得到较纯的、具有免疫原性和抑制补体活性功能的人sCR1融合蛋白。 　　5、体外采用CH50法作为终点指标进行定量证实，表达人sCR1分子胞外区基因融合蛋白有明显抑制补体活性的功能。 　　6、我们将原核表达的人sCR1融合蛋白和真核表达的人sCR1融合蛋白作为免疫原，分别免疫家兔后，制备出两种高效价兔抗人sCR1融合蛋白的特异性多克隆抗体，为建立敏感、特异的免疫学检测提供了可靠的实验方法。 　　7、重组人sCR1是CR1的胞外片段，属于人体自身成分，在治疗中不易引起免疫应答，因而安全性好，保留了CR1抑制补体活性的结构和功能，可作为一种内源性的补体调节蛋白治疗剂，用于阻断人类疾病时补体的不适当激活而造成的组织损伤，如自身免疫性疾病、炎症损伤、器官移植术后等方面的临床免疫学检测和治疗奠定了基础。