本项目是浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金项目。 　　本项目研究过程中利用荧光定量PCR技术，建立快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌等新发肠道致病菌的定量方法。分别选取肠出血性大肠杆菌O157﹕H7的O抗原特异性基因(rfbE)和O139群霍乱弧菌糖基转移酶基因（LPSgt）作为检测的靶基因，设计引物和TaqMan探针，探针的两端均进行荧光标记。对PCR扩增体系进行优化，分别建立实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌方法，该方法特异性好，灵敏度可达到10cfu/mL，重复性较好，定量检测的批间和批内的变异系数均小于5﹪，收集485例现场样本进行方法评价，结果获得15例肠出血性大肠杆菌O157﹕H7阳性和9例O139群霍乱弧菌O139阳性，与常规培养法结果完全一致。 　　上述的研究结果表明本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌等新发肠道致病菌实时荧光定量PCR方法快速、准确，结果可靠，实用性强，可对结果进行定量分析，为肠出血性大肠杆菌O157﹕H7感染性腹泻和O139群霍乱的临床诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段，并为进一步开展其他传染病致病菌的实时荧光定量PCR检测方法研究提供可靠的技术保障。

　　本项目是浙江省医药卫生优秀青年科技人才专项科研基金项目。 　　本项目研究过程中利用荧光定量PCR技术，建立快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌等新发肠道致病菌的定量方法。分别选取肠出血性大肠杆菌O157﹕H7的O抗原特异性基因(rfbE)和O139群霍乱弧菌糖基转移酶基因（LPSgt）作为检测的靶基因，设计引物和TaqMan探针，探针的两端均进行荧光标记。对PCR扩增体系进行优化，分别建立实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌方法，该方法特异性好，灵敏度可达到10cfu/mL，重复性较好，定量检测的批间和批内的变异系数均小于5﹪，收集485例现场样本进行方法评价，结果获得15例肠出血性大肠杆菌O157﹕H7阳性和9例O139群霍乱弧菌O139阳性，与常规培养法结果完全一致。 　　上述的研究结果表明本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157﹕H7和O139群霍乱弧菌等新发肠道致病菌实时荧光定量PCR方法快速、准确，结果可靠，实用性强，可对结果进行定量分析，为肠出血性大肠杆菌O157﹕H7感染性腹泻和O139群霍乱的临床诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段，并为进一步开展其他传染病致病菌的实时荧光定量PCR检测方法研究提供可靠的技术保障。