一、立题目的： 食物中毒等突发公共卫生事件发生时对引起突发事件的病原菌诊断非常重要且越快越好。副溶血弧菌引起的食物中毒是我市最为常见的突发公共卫生事件，随着大陆连岛工程的竣工,大量旅游人群的进入,副溶血弧菌性食物中毒将会大幅度增加。为此而研制一种用于副溶血弧菌诊断的快速荧光定量PCR方法，该方法可在15～30分钟内完成患者烘便于工作种有无副溶血弧菌以及是否携带耐热直接溶血素基因并具有定量、抗药物和杂菌干扰等作用。经现场多次应用取得十分满意的效果。 二、计划执行情况： 本课题目分二步进行，先在实验室内进行荧光PCR模板快速制备。副溶血弧菌的TLH、TOXR、THD、TRH四种基因的引物与探针序列进行了比对与设计；荧光定量PCR反应体系的优化等工作进行研究比较。第二步把实验室内研究成熟的成果应用于现场与常规细菌培养法进行比较。 三、应用效果与前景： 1、从2007年5月～2008年9月共接收12起食物中毒样本取得非常满意的效果。每次都得到上级领导的肯定，明显提高流行病学医生、临床医生、细菌实验室工作人员的工作质量，节约了大量的人力、物力与财力，应用前景广阔。 2、该成果还可应用于海产品副溶血弧菌致病菌株分布；构成比与消长规律的研究并初步发现国内外至今还未发现的规律性，应用这个规律可圆满解释海产品与副溶血弧菌性食物中毒高度相关性的理论。 四 创新点： 1、本课题研究的PCR模板快速制备技术是当前国际已知的方法中最快，可明显提高荧光定量PCR的检测速度。并具有操作简单、效果良好、价格低廉等优点。 2、本课题研究的快速荧光定量PCR方法应用于副溶血弧菌性食物中毒样本检测具有快速定量的优点外，还能一次性完成副溶血弧菌及其致病菌珠的毒力基因诊断。 3、本课题研究还发现贝类水产品中普遍携带副溶血弧菌致病菌株，其与普通副溶血弧菌的比例为1：100～10000，并随着季节变化而消长。

一、立题目的： 食物中毒等突发公共卫生事件发生时对引起突发事件的病原菌诊断非常重要且越快越好。副溶血弧菌引起的食物中毒是我市最为常见的突发公共卫生事件，随着大陆连岛工程的竣工,大量旅游人群的进入,副溶血弧菌性食物中毒将会大幅度增加。为此而研制一种用于副溶血弧菌诊断的快速荧光定量PCR方法，该方法可在15～30分钟内完成患者烘便于工作种有无副溶血弧菌以及是否携带耐热直接溶血素基因并具有定量、抗药物和杂菌干扰等作用。经现场多次应用取得十分满意的效果。 二、计划执行情况： 本课题目分二步进行，先在实验室内进行荧光PCR模板快速制备。副溶血弧菌的TLH、TOXR、THD、TRH四种基因的引物与探针序列进行了比对与设计；荧光定量PCR反应体系的优化等工作进行研究比较。第二步把实验室内研究成熟的成果应用于现场与常规细菌培养法进行比较。 三、应用效果与前景： 1、从2007年5月～2008年9月共接收12起食物中毒样本取得非常满意的效果。每次都得到上级领导的肯定，明显提高流行病学医生、临床医生、细菌实验室工作人员的工作质量，节约了大量的人力、物力与财力，应用前景广阔。 2、该成果还可应用于海产品副溶血弧菌致病菌株分布；构成比与消长规律的研究并初步发现国内外至今还未发现的规律性，应用这个规律可圆满解释海产品与副溶血弧菌性食物中毒高度相关性的理论。 四 创新点： 1、本课题研究的PCR模板快速制备技术是当前国际已知的方法中最快，可明显提高荧光定量PCR的检测速度。并具有操作简单、效果良好、价格低廉等优点。 2、本课题研究的快速荧光定量PCR方法应用于副溶血弧菌性食物中毒样本检测具有快速定量的优点外，还能一次性完成副溶血弧菌及其致病菌珠的毒力基因诊断。 3、本课题研究还发现贝类水产品中普遍携带副溶血弧菌致病菌株，其与普通副溶血弧菌的比例为1：100～10000，并随着季节变化而消长。