本课题属卫生领域输血医学学科，为2006年河北省科技厅立项项目，项目编号为：062761407。
Rh血型系统是人类最复杂的红细胞血型系统，也是输血医学最重要的血型系统之一，Rh血型抗原特别是RhD抗原具有很强的免疫原性，是临床上引致新生儿溶血病、溶血性输血反应的最重要血型抗原。弱D型是RhD抗原的变异体，可以引起同种免疫，在临床输血医学实践中有着非常重要的意义。目前，国内未见对弱D及部分D的系统研究报道，而在国际上经RHD全基因序列分析鉴定和GenBank登录的weakD型已达76种，在白种人群中D弱表现型分布频率约为0.2﹪～1﹪。那么中国人群D弱表现型的分子遗传背景是怎样的？人群分布频率又是多少？这些都是国内Rh血型研究领域的空白。另外，血型作为人类的一种遗传标记具有种族差异，对中国人D弱表现型进行研究也可以为人类血型遗传学研究提供有价值的数据。
为了深入了解中国人群RhD抗原弱阳性分子遗传背景及分布频率，邯郸市中心血站于2003年开展关于Rh血型系统中RhD抗原弱表现型相关研究，课题组通过长期的RhD阴性筛选定型工作，收集到多例D弱阳性标本，应用血型血清学及分子生物学PCR-SSP、DNA序列分析等检测技术对其分析鉴定。研究表明中国汉族人群D弱表现型占无偿献血人群的0.015﹪，明显低于白种人（0.2﹪～1﹪），且分子遗传背景呈现多样性，有多种D弱表现型存在；汉族人群D弱表现型中，弱D15型频率最高，占56.3﹪，在白种人中，70.3﹪为弱D1型；汉族人群部分D（partial D）的弱表现型中，DⅥⅢ型占主要比率。研究首次在中国人群中观察到弱D12型，弱D基因所存在的单倍体不同于白种人。根据对RHD基因数目分析，推测中国人群中弱D15基因存在于DCe和DcE单倍体上，其中弱D15基因存在于DCe单倍体上的个例在国内外文献中均未见报道。这是国内首次对中国汉族人群RhD抗原弱阳性分子遗传机制的系统研究报道，填补了国内Rh血型研究领域的这一空白，在临床上有着极为重要的免疫学意义。相关文章已陆续发表在输血医学权威杂志、中国科技核心期刊《中国输血杂志》、《中国实验血液学杂志》、《国外医学输血与血液学分册》、《临床输血与检验》等杂志上。经河北省科学技术信息研究所对相关医学文献进行检索，本课题组相关研究内容在国内处于领先地位。
本研究主要涉及分子生物学、血型血清学、人类遗传学、输血医学等多学科领域，对于在长期的RhD阴性筛选定型工作中收集到多例D弱阳性标本，首先采用常规血型血清学技术检测Rh D、C、c、E、e抗原表型，然后采用序列特异性引物－聚合酶链反应（SSP-PCR）方法同时检测RHD基因和RHCE基因，并用10对内含子引物分别特异性的扩增标本RHD基因的10个外显子，测序分析RHD基因全长编码区序列，与GenBank记录的RHD基因序列相比对，以发现碱基序列的异常。同时通过特异性PCR技术测定RHD合子型或RHD基因数目。结果显示，8例标本缺失RHD基因第3～6外显子，证实为携带RHD-CE（3～6）-D融合等位基因的部分D表型中的DⅥⅢ型。该型占D抗原弱阳性表型的25﹪，人群频率为0.00375﹪。24例标本的RHD基因的所有10个外显子均为阳性，其中1例标本的第1～4外显子和第6～10外显子与正常RHD序列相同，第5外显子与正常序列相比有8个相异点，即667T＞G,676G＞C,697G＞C,712G＞A,733G＞C,744C＞T,787G>A, 800A>T,序列与RHCE基因相同，证实此标本为携带RHD-CE（5）-D融合等位基因的部分D表型中的DⅤa(Hus)，占D抗原弱阳性表型的3.1﹪，人群频率为0.00046﹪；18例标本的RHD基因仅在第6外显子存在碱基突变845G＞A，为弱D15型，占D抗原弱阳性表型的56.3﹪，占weakD的78.3﹪，人群频率为0.00843﹪；1例标本仅RHD第6外显子存在碱基突变830G＞A，为弱D12型，占D抗原弱阳性表型的3.1﹪，占weakD的4.3﹪，人群频率为0.00046﹪；1例标本仅RHD第9外显子存在碱基突变1227G＞A（DEL），表明该例标本为携带DEL等位基因的弱D型，占D抗原弱阳性表型的3.1﹪，占weakD的4.3﹪，占人群比率为0.00046﹪；3例标本的10个外显子测序结果均未见异常，占D抗原弱阳性表型的9.4﹪，占weakD的13.0﹪，人群频率为0.0014﹪。
对弱D及部分D这些D弱表现型个体分子遗传背景进行深入的研究，最重要的目的是为了探讨对弱D及部分D个体的最适输血策略。国外已有弱D15型妇女被免疫产生抗－D的病例报道，德国基于对白种人D弱表现型的研究已制定了相应的输血策略，因此针对中国人群弱D型分子遗传背景的系统研究，对建立中国人弱D型的相关输血策略，进一步保证临床输血的安全有着重要的临床意义。 |
