β地中海贫血（简称β地贫）是世界范围内广泛流行的遗传性血液病，在我国南方也很常见。β地贫目前尚无有效的治疗方法，因此探讨新的治疗途径对于该病的防治具有重要的理论和实际意义。β珠蛋白基因第二内含子nt.654 C-T 突变（β654）是中国人常见和特有的β地贫类型。本工作在阐明β654地贫分子缺陷的机理基础上，针对该病的发病机理，即α/β珠蛋白肽链合成不平衡，首次提出降低β654地贫个体α珠蛋白基因的表达来治疗疾病的新思路，发展了同时降低β654地贫患者体内过多的α珠蛋白表达和升高正常的β珠蛋白表达来进行转录后基因治疗的新策略，并在细胞和β654地贫模型小鼠个体水平证实了这一基因治疗途径的有效性。 1、设计特异针对小鼠α珠蛋白链mRNA的RNAi片段载体及针对β654异常剪接位点的反义RNA载体，分别在Mel细胞、K562细胞和HeLa654细胞证实上述载体能有效地抑制α珠蛋白基因的表达、恢复β654 基因正常的剪接模式。 2、通过慢病毒载体介导，将上述载体转导致β654地贫模型小鼠的受精卵，成功的制备出整合有siRNA和/或反义RNA片段的β654小鼠家系。该β654小鼠出生三周后的存活率明显提高（从28.9﹪提高至51.6﹪），特别是在治疗小鼠的后代中发现了存活的纯合子β654小鼠。表明经治疗的患病小鼠的生存状况得到了改善。 3、经治疗的患病小鼠的血液学参数明显改善，地贫表型好转，且这种改善可遗传至后代。 4、治疗后β654小鼠髓外造血的情况明显改善，表现在脾脏体积和重量的减少，红髓的范围缩小，并且出现了清晰的红髓和白髓的分界，血窦的数量减少并且变小；骨髓增生度降低；肝脏铁离子沉积减少。 5、构建了人β-珠蛋白基因的慢病毒表达载体，通过卵周隙显微注射的方法，成功地制备了转人β-珠蛋白基因的β654小鼠。其后代中β654小鼠出生后3周的存活率明显提高。 6、通过对转人β-珠蛋白基因的β654小鼠家系连续三代的分析证实人β-珠蛋白肽链可在转人β珠蛋白基因小鼠的血液中稳定表达。 7、对转人β-珠蛋白基因的β654小鼠进行血液学检查表明，其血红蛋白和红细胞水平提高，外周血中异型细胞和靶型细胞的比例下降，网织红细胞数目减少。病理学观察发现脾脏体积减少，红髓减少，髓外造血减轻，肝脏中铁离子沉积减少，贫血表型明显改善。上述基因治疗实验结果证明调节α/β珠蛋白基因表达的平衡可改善β地贫小鼠红系细胞的生成，并缓解贫血症状，从而获得理想的治疗效果。 本工作为β地贫的治疗提供了有价值的科学资料和理论依据，具有重要的理论和实际应用价值。

β地中海贫血（简称β地贫）是世界范围内广泛流行的遗传性血液病，在我国南方也很常见。β地贫目前尚无有效的治疗方法，因此探讨新的治疗途径对于该病的防治具有重要的理论和实际意义。β珠蛋白基因第二内含子nt.654 C-T 突变（β654）是中国人常见和特有的β地贫类型。本工作在阐明β654地贫分子缺陷的机理基础上，针对该病的发病机理，即α/β珠蛋白肽链合成不平衡，首次提出降低β654地贫个体α珠蛋白基因的表达来治疗疾病的新思路，发展了同时降低β654地贫患者体内过多的α珠蛋白表达和升高正常的β珠蛋白表达来进行转录后基因治疗的新策略，并在细胞和β654地贫模型小鼠个体水平证实了这一基因治疗途径的有效性。 1、设计特异针对小鼠α珠蛋白链mRNA的RNAi片段载体及针对β654异常剪接位点的反义RNA载体，分别在Mel细胞、K562细胞和HeLa654细胞证实上述载体能有效地抑制α珠蛋白基因的表达、恢复β654 基因正常的剪接模式。 2、通过慢病毒载体介导，将上述载体转导致β654地贫模型小鼠的受精卵，成功的制备出整合有siRNA和/或反义RNA片段的β654小鼠家系。该β654小鼠出生三周后的存活率明显提高（从28.9﹪提高至51.6﹪），特别是在治疗小鼠的后代中发现了存活的纯合子β654小鼠。表明经治疗的患病小鼠的生存状况得到了改善。 3、经治疗的患病小鼠的血液学参数明显改善，地贫表型好转，且这种改善可遗传至后代。 4、治疗后β654小鼠髓外造血的情况明显改善，表现在脾脏体积和重量的减少，红髓的范围缩小，并且出现了清晰的红髓和白髓的分界，血窦的数量减少并且变小；骨髓增生度降低；肝脏铁离子沉积减少。 5、构建了人β-珠蛋白基因的慢病毒表达载体，通过卵周隙显微注射的方法，成功地制备了转人β-珠蛋白基因的β654小鼠。其后代中β654小鼠出生后3周的存活率明显提高。 6、通过对转人β-珠蛋白基因的β654小鼠家系连续三代的分析证实人β-珠蛋白肽链可在转人β珠蛋白基因小鼠的血液中稳定表达。 7、对转人β-珠蛋白基因的β654小鼠进行血液学检查表明，其血红蛋白和红细胞水平提高，外周血中异型细胞和靶型细胞的比例下降，网织红细胞数目减少。病理学观察发现脾脏体积减少，红髓减少，髓外造血减轻，肝脏中铁离子沉积减少，贫血表型明显改善。上述基因治疗实验结果证明调节α/β珠蛋白基因表达的平衡可改善β地贫小鼠红系细胞的生成，并缓解贫血症状，从而获得理想的治疗效果。 本工作为β地贫的治疗提供了有价值的科学资料和理论依据，具有重要的理论和实际应用价值。